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转Bt基因水稻对土壤微生物群落结构的影响-农学论文 转Bt基因水稻对土壤微生物群落结构的影响 关 潇１，吴 刚２，王 敏１ （１．中国环境科学研究院，北京 １０００１２；２．华中农业大学植物科学技术学院，武汉 ４３００７０） 摘要：在大田环境下种植转Ｂｔ基因水稻（ＨＨＩ与Ｂｔ－ＳＹ６３）和亲本对照非转Ｂｔ基因水稻（ＭＨ６３与ＳＹ６３），分别在稻田休耕期、水稻苗期、分蘖期、抽穗期、成熟期、收获后采集土壤样品，分析转基因水稻种植对土壤微生物群落的影响，探讨转Ｂｔ基因水稻对土壤微生态系统的影响，旨在为转基因水稻的生态风险评价提供依据。结果表明，非转基因组土壤微生物群落结构特征具有一定的相似性，转基因组也具有类似的土壤微生物群落结构，但转Ｂｔ基因组水稻对土壤微生物群落结构具有一定影响；转基因水稻与非转基因组相比，土壤微生物生物总量差异不显著，转Ｂｔ基因水稻根际土壤中的细菌、真菌、放线菌随季节变化趋势明显，转基因组与非转基因组之间不存在显著差异（Ｐ＞０．０５）。 关键词 ：转Ｂｔ基因水稻；土壤；微生物；细菌；真菌 中图分类号：Ｑ７８５；Ｓ５１１；Ｓ１５４．３７ 文献标识码：Ａ 文章编号：０４３９－８１１４（２０１５）０５－１０４６－０７ ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１５．０５．００６ 收稿日期：２０１４－１２－１６ 基金项目：国家转基因生物新品种培育重大专项（２０１４ＺＸ０８０１２－００５）；华中农业大学创新团队Ｂ类培育项目（２０１３ＰＹ０４６） 作者简介：关 潇（１９７８－），女，山西怀仁人，博士，研究方向为遗传资源与生物安全，（电话）１８９７１６２１１２６（电子信箱）ｃｙｎｔｈｉａ８１５＠１２６．ｃｏｍ。 土壤微生物是土壤生态环境系统的重要组成部分，其多样性和活性是保持生态系统稳定的基础，而作物的改变不可避免地会影响土壤微生物区系的组成和结构，转基因作物的种植也可能对根际微生物的土壤环境产生影响，进而影响整个土壤生态系统的功能和农业生态系统的健康与稳定。转基因作物对土壤生态环境的影响是转基因作物安全评价的重要组成部分，因此，研究转基因作物对土壤微生物种群数量、活性等的影响具有极其重要的意义。转基因作物种植对土壤潜在影响的核心内容是其影响土壤的生态进程，此方面的研究主要集中于转Ｂｔ基因作物方面［１］。目前有关转基因作物外源基因的表达产物在土壤中的行为，主要以转Ｂｔ基因作物表达产物Ｂｔ蛋白在土壤中行为的研究为主。转基因作物释放外源基因表达产物进入土壤中的途径有很多种，其中最直接的主要有三个方面，一是通过植株残茬残留［２］。随着水稻秸秆还田技术在农业生产上的大面积推广应用，转Ｂｔ基因水稻在收割前后遗留在田间的植株残茬通过耕作方式向土壤微生态系统释放Ｂｔ杀虫结晶蛋白是Ｂｔ毒蛋白进入土壤生态系统中最重要的途径。研究表明，Ｂｔ毒素可通过枯枝落叶残留在土壤中，并与土壤中的颗粒相结合而存在［３，４］。二是通过根系分泌。根系分泌物可影响土壤的生物学和理化性质，并对土壤养分的释放与有效性产生较大效应。三是通过花粉释放。转Ｂｔ水稻在花粉中会表达Ｂｔ杀虫结晶蛋白，转基因作物中花粉的散布成为外源基因逃逸的渠道之一［５，６］。转Ｂｔ基因作物长期种植会使Ｂｔ毒素在土壤生态系统中富集，影响土壤的特异生物种群、功能类群、土壤微生物多样性与活性以及土壤生态学过程［７］。 土壤微生物是土壤生物中的一个重要类群，是气候和土壤环境条件变化的敏感指标，土壤微生物群落结构和多样性及其变化在一定程度上反映了土壤的质量［８］。转基因作物的非收获部分随秸秆还田等进入土壤，作物残体较长时间存留于土壤中，延长了土壤微生物对植物组织的接触时间，作物残体在土壤中的降解过程及降解产物可能会对微生物群落及土壤酶活性产生一系列影响，转基因作物根系分泌物能否对土壤微生物群落产生负面的影响也是环境风险评估的重要组成部分。一些研究认为转基因作物对土壤微生物有显著影响。Ｄｏｎｅｇａｎ等［９，１０］发现种植转Ｂｔ基因马铃薯和转Bt基因抗虫棉秸秆土壤中的微生物数量、种类和组成与常规对照存在显著差异。任馨等［１１］研究转Ｂｔ基因水稻成熟期秸秆和同一时期亲本稻秸秆的添加对淹水土壤可培养厌氧细菌数量和细菌群落组成的影响结果表明，与亲本对照相比，培养初期克螟稻秸秆的添加对淹水土壤厌氧发酵性细菌、产氢产乙酸细菌、反硝化细菌和产甲烷细菌的数量产生了显著性影响，但培养后期这种显著性差异基本消失；ＰＣＲ结合变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）指纹图谱和主成分分析（ＰＣＡ）结果表明，两种秸秆处理土壤细菌群落组成在培养的第三周和第五周达到显著差异，随着培养时间的延长，两种秸秆处理土壤间细菌群落组成的差异逐渐减小