生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析教学幻灯片.pptVIP

;酶促水解 化学水解: 酸水解:碱基、核糖/脱氧核糖和磷酸 碱水解:RNA存在2′-OH，磷酸二酯键不稳定，得单核苷酸; 磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷钼酸铵沉淀 (1mL $ + 1mL定磷试剂)： (NH4)2MoO4 + H3PO4 → (NH4)3PO4·12MoO3↓(黄色) Mo6+ SnCL2 Mo4+ Mo(MoO4)2 (兰色) ;嘌呤碱与硝酸银作用产生白色的嘌呤银化合物 (1mL $ + 过量氨水 + 1mL 0.1M的AgNO3)。;;;;;①RNA的酸解 将装有待测RNA的三角瓶，在电炉上加热，至溶液透明为止，得到RNA的水解液，期间不停晃动，以使受热均匀。 [注意] RNA加热酸解时，一定注意观察，本步很容易加热过度，使透明溶液变成黑褐色，而导致实验失败。;.;待测样品适当稀释（如量取100μL RNA水溶液，加2900μL 蒸馏水混匀），用紫外分光光度计分别测定其230nm、260nm 和280nm 的吸光度值。 可根据自己的样品浓度调整稀释倍数。 黑体－透射调零 蒸馏水－??射调100％ 吸收调零;配平：含液离心管与外套铁管在一起两组配平（先选两个外套铁管重量接近）对称放于离心机的铁套中。 设置：闭盖，选离心机设置键（“亮点”在转速和时间的选择上：可通过三角符号移位，然后再增减），设置数都完成后再按确认键。 启动：使“亮点”回到测定位置，按启动键。转动期间盖子打不开。 若声音很大异常。立即按停止键。;通过实验现象说明鉴定的结果，由结果进一步说明你的提取物是什么？ 计算RNA溶液浓度及酵母RNA得率，并判断样品纯度。 将组分定性鉴定实验结果交老师过目评分，然后清洗离心管，整理实验台，用具归位，试剂瓶从高到低排列。;1、以酵母为材料提取RNA有什么优点？ 2、如何对核酸水解组分进行鉴定？ 3 、利用紫外分光光度法如何判断核酸样品的纯度。