常见的肺癌ALK靶点检测研究进展.pptVIP

实时逆转录法（RT-PCR）原理 * 逆转录酶（AMV）催化合成cDNA第一条链 加入PCR成分 用Takara Ex TaqTM HS合成cDNA第二条链 扩增cDNA RT- PCR试剂盒的原理 EML4 ALK 上游引物 下游引物 融合点 检测探针 VENTANA IHC 试剂设计 ALK融合蛋白: 无ALK重排的NSCLC不表达ALK融合蛋白 部分ALK融合蛋白表达较低 Ventana IHC的原理: 使用具有高度敏感性和特异性的一抗——D5F3 全自动仪操作，充分保证特异性 独有Optiview扩增技术，充分保证敏感性 D5F3 rabbitt monoclonal antibody Optiview DAB IHC Detection Optiview Amplification Kit 0 1+ 2+ 3+ Neg Pos Pos Pos CST-IHC Ventana-IHC Pos Ventana-IHC原理：在常规IHC之后加入扩增信号，并且通过充分洗涤一抗避免假阳性 ----创建一个“二元”的判读系统 J.Ying,et al. Annals of Oncology 2013; Ventana IHC与FISH检测结果比较 FISH 总数 敏感性 特异性 一致率 阳性 阴性 Ventana IHC(1) 阳性 46 7 53 100% 98.20% 98.40% 阴性 0 377 377 Ventana IHC(2) 阳性 31 0 31 94% 100% 99.10% 阴性 2 198 200 Ventana IHC(2) 阳性 32 0 32 100% 100% 100% 阴性 0 217 217 Ventana IHC(3) 阳性 40 2 42 91% 96% 94% 阴性 4 53 57 Ventana IHC(4) 阳性 18 0 18 90% 100% 99.60% 阴性 2 503 505 Ventana IHC(5) 阳性 63 2 65 100% 98.4% 98.9% 阴性 0 131 131 (1)Jinghui Wang,et al. PLoS ONE 2014 9(7): e101551 (2) Eugen C. Minca,et al. J Mol Diagn 2013, 15: 341-346 (3) Murry W. Wynes,et al. J Thorac Oncol. 2014;9: 631–638 (4) Greta,et al. Arch Pathol Lab Med. doi: 10.5858/arpa.2013-0388-OA （5）J.Ying;et al. Annals of oncology.2013,24:2589-2593 全自动VENTANA IHC优势一 判读标准简单，仅存在阴性 or 阳性的判读 IHC 阳性 = FISH 阳性 全自动VENTANA IHC优势二 全自动检测，避免操作流程中的误差，可重复性好 全自动VENTANA IHC优势三 价格便宜，可同时用于ALK的筛选和诊断 EMEA（欧盟）、CFDA批准Ventana IHC用于诊断ALK阳性NSCLC，从而帮助确定可使用克唑替尼的患者 VENTANA IHC试剂盒已于2013.8全部获得CFDA批准，用于检测ALK阳性NSCLC ALK ALK Ventana检测推荐的检测时间 1：节约标本--针对非小细胞肺癌在第二次切片的时候多切2张切片 2：节约费用—用IHC的方法让更多患者得到筛查 3：节约时间—随病理大报告同时得到ALK结果 细胞学标本检测ALK 针对锁骨上淋巴结FNA，和胸水，都可以常规进行Ventana IHC检测 * 传统的病理分型主要依赖显微镜下的组织分型，随着科学技术的进步，这一传统方式已不再完全适用于癌症的诊断，在NSCLC中，组织病理分型演变为分子分型，NCCN指南也指出对于NSCLC患者需要检测基因型别。 * 那么为什么称为精确的分子病理诊断？首先，诊断里面有两大更新，第一大更新是病理报告的内容。在2011版里面，病理报告的内容是不需要提到分子检测结果的，在2015版里面我们规定了，标准的病理报告里面，诊断内容必须包括肿瘤部位、组织学亚型、累积范围等等，其中新增加了分子检测结果。这一条更新在临床实践中进一步规范了诊断，我们都知道标准的非小细胞肺癌诊断，比如说右上叶肺腺癌，T3N2M1，转移部位是骨，IV期，这是以前的标准肺癌诊断，但是由于诊疗规范，病理报告必须要明确分子病理检测结果，以后的标准肺癌诊断里面必须添加基因状态，如ALK阳性或EGFR阳性/阴性。标准诊断必须包含分子基因检测结果，特别是EGFR和ALK。第二个更新是在非小细胞肺