副猪嗜血杆菌荧光定量PCR方法建立和初步应用.PDFVIP

2018年第35卷第9期 副猪嗜血杆菌荧光定量PCR 方法的 建立及初步应用 崔　沛，王东方，闫若潜，王淑娟，冉晓龙，班付国 （河南省动物疫病预防控制中心，河南郑州　450008 ） Haemophilus parasuis HPS PCR Fluorescence 摘　要 ：为建立一种快速、敏感、特异的副猪嗜血杆菌 （ ， ）荧光定量 （ Quantitative PCR FQ-PCR GenBank HPS S rRNA ， ）检测方法，根据 登录的 16 基因序列，设计1 对特异性引物和1 条特异性TaqMan-MGB 探针，建立了HPS 荧光定量PCR 检测方法，并对方法的敏感性、特异性以及重复性和稳定 性进行了验证。结果显示：本研究建立的HPS FQ-PCR 方法在101~ 6 拷贝/μL 10 模板范围内有很好的线性关系，所得 . /μL PCR pGEM-T/HPS 相关系数为0 998 ；检测灵敏度可达 10 拷贝 ，是常规 的10 倍；特异性好，对 重组质粒扩增 呈现阳性反应曲线，而对4 个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应；对不同浓度的pGEM-T/HPS 重组质粒分别重复 HPS HPS 扩增3 次，重复结果良好。对30 份临床疑似 感染的组织样品进行应用检测，检出19 份阳性，比商品化的 FQ-PCR 检测试剂盒及常规PCR 方法的阳性检出率高。结果表明，本研究建立的HPS FQ-PCR 方法具有敏感性高、 特异性好、稳定性强的优点，可用于临床HPS 感染猪的早期检测，对HPS 的快速诊断、综合防控具有重要意义。 关键词 ：副猪嗜血杆菌；荧光定量PCR ；建立 S . A - X - - 中图分类号 ：852 61　　文献标识码 ： 　　文章编号 ：1005 944 （2018 ）00 0101 05 DOI . /j.issn. - X. . . ：10 3969 1005 944 2018 09 025 Establishment and Preliminary Application of Fluorescence Quantitative PCR Assay for Detection of Haemophilus parasuis Cui Pei，Wang Dongfang ，Yan Ruoqian ，Wang Shujuan ，Ran Xiaolong ，Ban Fuguo Henan Animal Disease Prevention and Control Center Zhengzhou Henan China （ ， ，