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麦斯衣陶芬无花果离体快速增殖的研究 　　摘要：以麦斯衣陶芬无花果幼嫩枝条为试材，研究了外植体材料、基本培养基以及激素种类和配比等因素对其离体快速增殖的影响。结果表明，适宜麦斯衣陶芬无花果离体快速增殖的外植体为腋芽，培养基为改良MS+1mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+1mg/LGA3+20mg/L蔗糖+7mg/L琼脂粉，pH值为5.8。 　　关键词：麦斯衣陶芬无花果；离体繁殖；增殖倍数 　　中图分类号：S663.304+.3文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）11-0073-02 　　麦斯衣陶芬无花果，因其果大俗称巨型无花果，原产美国加州，从日本引入我国。试种观察结果表明，麦斯衣陶芬是目前最有推广前途的无花果优良品种之一，适宜长江以南地区栽培。无花果生产上多采用扦插繁殖[1]，也有外来无花果嫁接培育方法，但与材料来源多、增殖率高的试管离体快速培养苗木繁殖相比，具有材料来源少、繁殖率低、费工费时、受季节限制严重、场地面积占用大等问题，难以满足当前大面积栽培及推广的需要；此外，从育种角度来讲，无花果为隐头花序，小花隐生于囊状总花托内，不能利用常规杂交育种技术进行品种改良和更新。随着生物技术在果树育种中的成熟应用，转基因技术无疑是改良品种的首选方法。而转基因技术又是以组织培养为前提、为基础的一门技术，因此，要想利用转基因技术进行无花果育种就必须先建立无花果离体培养的快速增殖体系。尽管宋仪农等近几年来对不同品种无花果的组织培养离体快繁技术作了相应的报道[2-5]，但没有麦斯衣陶芬无花果的离体快速增殖方法的相关报道。基因型往往决定着离体培养的成败，不同基因型对不同激素的种类及浓度搭配要求不同[6-7]。本研究以麦斯衣陶芬无花果为试验材料，试图建立其离体快速增殖的方法，以供参考。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　麦斯衣陶芬（MasuiDauphine）无花果生长旺盛的幼嫩枝条。 　　1.2方法 　　1.2.1外植体冲洗剪取处于旺盛生长的幼嫩枝条，将其剪成带单芽的茎段，芽上方剪留0.5cm长，芽下茎段剪留1～1.5cm长，顶芽单独截取。用洗衣粉反复清洗数遍，流水冲洗2h，装入保鲜袋中备用。 　　1.2.2防褐化处理将装有单芽的保鲜袋放入4℃的冰箱，预冷4h后取出，擦干表面水分，置于1500mg/L的维生素C溶液中浸泡30min，备用。 　　1.2.3表面消毒将进行过防褐化处理的单芽，先用75%乙醇浸泡30s，无菌清水冲洗2遍，无菌纸擦干表面水分，再转入0.1%HgCl2溶液中消毒8min，不间断地晃动瓶子，使外植体与溶液充分接触，促使消毒更彻底。然后，用无菌清水反复冲洗外植体数遍，直至将HgCl2完全冲洗干净，倒掉多余清水，用无菌纸吸干外植体表面水分。 　　1.2.4扦插分别将每个外植体的剪口处再剪掉0.2cm长，按照芽的极性，将下端扦插入诱导培养基（基本培养基）中，培养20～30d，待小苗长至0.4～0.5cm时切下，转到增殖培养基中进行增殖培养。 　　1.2.5筛选外植体以腋芽和顶芽为试材，扦插在基本培养基上进行培养，每瓶培养基中接种3个外植体，每处理10瓶，设3次重复，培养15～20d后调查统计。 　　1.2.6基本培养基选用MS、3/4MS、1/2MS和改良MS（以MS培养基母液的配方为基础，用四水硝酸钙替换大量元素中的无水氯化钙，经换算，其用量为无水氯化钙的2.12倍）4种基本培养基，分别在其中添加1mg/L6-BA和0.05mg/LNAA对幼苗进行培养，每瓶培养基中接种1株幼苗，每处理10瓶，设3次重复，培养30d后调查统计。 　　1.2.7筛选激素种类及浓度配比细胞分裂素选用0.5、1、2mg/L6-BA，生长素选用0.05、0.1mg/LNAA，0.4mg/LIBA和0.2、0.4、0.5、1、2mg/LGA3分别进行组配，每瓶培养基中接种1个外植体，每处理10瓶，设3次重复，培养30d后调查统计。 　　1.2.8生根及移栽选用1/2改良MS+0.5mg/LIBA+20mg/L蔗糖+7mg/L琼脂粉、pH值5.8的培养基进行生根，并移栽。 　　2结果与分析 　　2.1外植体对成苗的影响 　　腋芽和顶芽均能培养成健壮苗，且2种外植体的成苗率基本相同（表1）。顶芽经过防褐化和消毒处理后极易白化，白化率高达17%，腋芽白化率仅为6%，且腋芽取材容易，来源广，综合考虑，用腋芽作试材更经济方便。 　　2.2基本培养基对无花果增殖倍数的影响 　　由表2可以看出，幼苗在改良MS基本培养基中植株长势健壮，叶色绿，株高达7.1cm，增殖倍数最高，达26.7倍，愈伤组织分化的量也较多，白嫩且晶莹剔透，说明改良MS基本培养基更适于麦斯衣陶芬无花果离体快速培养。 　　2.