框内缺失突变法构建变形链球菌co.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（７）：８０～８６ 框内缺失突变法构建变形链球菌 ｃｏｍＥ基因突变株 刘筱娣　杜　宁　郭丽宏 （北京大学口腔医学院／口腔医院　北京　１０００８１） 摘要　变形链球菌的种内密度感应系统由ｃｏｍ基因家族编码控制。膜受体ＣｏｍＤ接受密度感应 信号后激活菌体内的反应调节子ＣｏｍＥ，ＣｏｍＥ作为启动子可以调节一系列相关基因的表达。应 用框内缺失突变法（ｉｎｆｒａｍｅｄｅｌｅｔｉｏｎ），通过两次同源性重组，成功构建了变形链球菌ｃｏｍＥ基因 ? 突变株ＩＦＤ１４０ｃｏｍＥ。由于框内缺失突变没有引入任何的遗传标记物，所以有效地避免了传统 Δ 的基因失活方法———插入重复（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ）和等位交换（ａｌｌｅｌｉｃｅｘｃｈａｎｇｅ），所导致的下 游基因极性效应（ｐｏｌａｒｅｆｆｅｃｔ）。经过ＰＣＲ、测序分析及ＲＴＰＣＲ，证实ＩＦＤ１４０ｃｏｍＥ仅在ｃｏｍＥ基