扇贝裙边中抗氧化活性肽和牛磺酸的综合提取工艺-研究.pdf

捅要 抗氧化活性肽是具有清除自由基能力的多肽，可以维持机体内的正常代谢， 改善人体生理功能，延缓衰老，保护人体健康。与其他抗氧化剂相比，具有更强 的抗氧化活性、多样性和安全性，人们对天然抗氧化肽的需求量越来越高。因此， 从不同生物中制备抗氧化活性肽是近几年研究的热点问题。扇贝是我国重要的经 济海产品，近几年扇贝养殖业发展迅速，扇贝加工生产的扇贝柱口感上佳，味道 鲜美，是国际上公认的高档水产品。在扇贝柱的生产加工过程中，会产生大量的 扇贝裙边下脚料，其内含有丰富的营养成分和多种生物活性物质，例如牛磺酸、 蛋白质、DHA等等。人们已经从扇贝裙边中提取了抗氧化活性肽，但是在制取 的过程中，其中的牛磺酸被浪费掉。牛磺酸由于具有独特的生理和药理功能，广 泛应用于食品和药品两方面。天然牛磺酸与化学合成的牛磺酸相比，具有无毒性， 副作用小，工艺操作相对简单，投资少等特点。人们致力于从海洋生物中获取牛 磺酸的工艺研究。研究表明，扇贝裙边可以作为提取牛磺酸的材料，但在制取牛 磺酸的过程中，大量的蛋白质随废水流出。如果能够采用合理的途径从扇贝裙边 中同时提取出抗氧化活性肽和牛磺酸，不仅可以避免资源浪费和环境污染，而且 可以最大化地提高经济效益。 因此，本文以扇贝裙边为原料，对抗氧化活性肽和牛磺酸的综合提取工艺进 行研究。主要通过优化扇贝裙边蛋白质的提取工艺；正交实验确定碱性蛋白酶、 中性蛋白酶、酸性蛋白酶水解扇贝裙边蛋白质的最佳酶解条件；对得到的酶解多 肽进行分离纯化；研究各多肽组分和混合肽的抗氧化活性；在提取扇贝裙边蛋白 质的同时，对蛋白质盐析后离心的上清液进行牛磺酸的提取工艺研究。具体研究 内容和结果如下： 扇贝裙边蛋白质的最佳提取工艺为：扇贝裙边预处理，以料液比1：5(m／v)， 4。C条件下浸提4h，离心得上清；50％一60％饱和度的硫酸铵盐析，离心得蛋白质 沉淀，缓冲液溶解蛋白质沉淀；透析除盐；以O．02mol／LpH6．5醋酸铵作为洗脱 液，洗脱速度0．5mL／min，上样量1 G．75凝胶过滤层析；收 0mL，进行Sephadex 集合并洗脱峰，冷冻干燥，于．20。C冰箱保存。 采用四因素三水平的正交实验对碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶的酶 解条件进行优化。最终确定出碱性蛋白酶对扇贝裙边蛋白质的最佳酶解条件：加 万方数据 蛋白质的最佳酶解条件：加酶量为8000U／g，反应pH7．0，温度45。C，反应时间 3h；酸性蛋白酶对扇贝裙边蛋白质的最佳酶解条件：加酶量为4000U／g，反应 pH4．0，温度45℃，反应时间4h。 对三种酶解产物的多肽和经SephadexG一25凝胶过滤层析得到的洗脱峰组分 进行抗氧化活性测定，结果表明中性蛋白酶的酶解产物对羟自由基的清除率最高 酶解产物对DPPH自由基的清除率最高，但最大清除率仅为34．76％，对DPPH 自由基的清除能力一般。 扇贝裙边中牛磺酸的提取工艺为：对蛋白质盐析后离心的上清液进行色素吸 附；以蒸馏水为洗脱液，流速1．5mL／min，加样量2mL，进行H+型阳离子树脂 交换层析，得到纯品牛磺酸，测定牛磺酸的回收率为70．26％，虽然低于其他海 洋生物提取牛磺酸的回收率，但是从扇贝裙边中成功获取两种提取物。 关键词：扇贝裙边；抗氧化活性肽；牛磺酸；提取工艺 万方数据 Studiesof ExtractionProcess Comprehensive from andTaurine Skirt Peptide Scallop Abstract Antioxidanthasthe of