药用植物细叶石仙桃内生细菌的分离和鉴定.PDFVIP

药用植物细叶石仙桃内生细菌的分离和鉴定 浙江省台州市第一中学 詹昕烨 摘 要 细叶石仙桃（Pholidota cantonensis ）是一种兰科药用植物，在我国的浙江、江西、 福建、湖南、广东和广西等省均有分布，被列为国家珍稀濒危Ⅱ级保护物种。近年来， 研究人员从繁殖特性、遗传多样性、保护生物学、化学成分和药理作用等方面对其开展 了大量研究，但是有关该植物内生细菌分离和鉴定方面的研究未见报道。因此，我以细 叶石仙桃为实验材料，在分离和培养内生细菌的基础上，利用分子生物学手段对它们进 行鉴定和分析。 本课题研究内容分二部分： 1．了解细叶石仙桃在台州的分布情况。 2 ．细叶石仙桃内生细菌的分离和鉴定： ●细叶石仙桃的采集及内生细菌的分离与培养； ●细叶石仙桃内生细菌16S rDNA 序列的PCR 扩增； ●细叶石仙桃内生细菌的鉴定。 结果显示：台州9 个县、市、区均有细叶石仙桃分布。 细叶石仙桃内生细菌均为革兰氏阴性细菌，初步鉴定为杆菌。通过序列比对结果， 从雁荡山、白岩山和划岩山三处采集的细叶石仙桃中共分离到13 种内生细菌，隶属于9 个不同的属：果胶杆菌属、克氏杆菌属、泛菌属、假单胞菌属、科泽氏菌属、类芽孢杆 菌属、芽孢杆菌属、藤黄色杆菌属、肠杆菌属。不同采集地的内生细菌有差异。 本课题的研究，将为开展细叶石仙桃内生细菌的应用研究提供一定的基础材料。 1.研究背景 作为一名植物爱好者，我从小喜欢摆弄花花草草，对于一些不认识的植物更是充满 好奇。今年暑假，我和父母去黄岩富山大裂谷游玩，途径宁溪农副产品市场，发现有位 农民伯伯在卖一种我没有见过的“草药”：它茎、叶有些像我家栽种的石斛，但靠近根 部却有一个个形如小桃子的卵圆形假鳞茎。老伯伯告诉我它叫“岩珠”，是一味凉药， 可以治疗高血压、头痛、头晕等，还说有人用它假冒石斛（石斛价格较之更高）。 1 通过文献查阅我了解到“岩珠”的学名是细叶石仙桃（Pholidota cantonensis ），属 于兰科（Orchidaceae ）植物。兰科是单子叶植物中的第一大科，全世界约有700 属近20000 种。我国是兰科植物的重要产地之一，约有 173 属 1200 种，主要产于云南、四川、台 [1-2] 湾、海南、广西和广东等地 。兰科植物具有较高的观赏价值和经济价值，有些种类 还有一定的药用价值。石仙桃属是兰科植物的重要类群，全世界约有30 种，我国有 10 [2] 余种，多产于西南、华南和台湾等地区 ，浙江省有石仙桃（P. chinensis ）和细叶石仙 [3] 桃分布 。 细叶石仙桃是石仙桃属植物中的一个重要物种，被列为国家珍稀濒危Ⅱ级保护物 种。细叶石仙桃株型优美、花型幽雅、果实玲珑可爱，具有一定的观赏价值和药用价值， [3] 它全草均可入药，味微甘、性凉，具有清热凉血、滋阴润肺和消肿止痛的功效 ，其中 [4-5] 的多糖成分还具有显著的镇痛和抗氧化作用 ；此外，细叶石仙桃还有助于骨骼愈合， 常用于治疗骨折[6] 。目前对于石仙桃的研究主要集中在其化学成分和药理活性方面。 从文献中还得知，高等植物常有内生细菌（Endophytic bacteria ）、外生细菌和附生 细菌，其中的内生细菌与植物共生，它们通常互惠互利。植物给细菌提供合适的生活环 境，而内生细菌则回馈特殊的化学物质，以促进植物的生长，目前有关细叶石仙桃内生 细菌的研究未见报道。因此我决定以细叶石仙桃为材料，在分离培养内生细菌的基础上， 克隆其16S rDNA 序列并进行种属鉴定，为后续细叶石仙桃内生细菌资源的应用奠定基 础。 中医药是我们祖先留下的宝贵财产，目前国务院发表的《中国的中医药