正交试验法优选乌拉尔甘草总黄酮提取工艺研究-毕业论文（设计）.docVIP

第 PAGE 2页 第 PAGE 1页 第 PAGE 1页 正交试验法优选乌拉尔甘草总黄酮提取工艺研究 [摘要]：目的：用正交法研究提取甘草中的甘草总黄酮类化合物最佳提取工艺。方法：选取乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比及提取次数进行单因素试验，采用正交法，以甘草总黄酮类化合物得率作为检测指标。结果：经过正交试验得出的最佳工艺条件为：乙醇浓度80%，料液比1:20，提取时间2h，提取温度70℃，回流提取次2 关键词：甘草 总黄酮 正交试验 提取工艺 吸光度 正交试验法优选乌拉尔甘草总黄酮提取工艺研究 [摘要]：目的：用正交法研究提取甘草中的甘草总黄酮类化合物最佳提取工艺。方法：选取乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比及提取次数进行单因素试验，采用正交法，以甘草总黄酮类化合物得率作为检测指标。结果：经过正交试验得出的最佳工艺条件为：乙醇浓度80%，料液比1:20，提取时间2h，提取温度70℃，回流提取次2 关键词：甘草 总黄酮 正交试验 提取工艺 吸光度 甘草为双子叶植物豆科甘草，胀果甘草， 或光果甘草的根及根茎。始载于《神农本草经》，列为上品。甘草性平，味甘，归十二经。有解毒、祛痰、止痛、解痉以至抗癌等药理作用。在中医上，甘草补脾益气，滋咳润肺，缓急解毒，调和百药。临床应用分“生用”与“蜜炙”之别。生用主治咽喉肿痛，痛疽疮疡，胃肠道溃疡以及解药毒、食物中毒等；蜜炙主治脾胃功能减退，大便溏薄，乏力发热以及咳嗽、心悸等。甘草是我国传统常用中草药之一，也是我国重要的植物资源[1]。甘草黄酮类成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤、增强心血管功能、增强免疫力等作用[2-5]。 1．仪器与试剂 2 材料与方法 3 结果与分析 4 结论与讨论 2.1 材料 乌拉尔甘草，粉碎，待用。对照品，芦丁。 乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等，均国产分析纯试剂。 2.2 仪器 FZ102五星植物试样粉碎机（北京永光明医疗仪器厂）、DZKW-4型双列六孔水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司）、T6新悦-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）、SHB-3循环水多用真空泵（郑州杜甫仪器厂）、FA1604N电子天平（上海精科仪器厂）、回流装置、圆底烧瓶、烧杯、滤纸、玻璃棒、滴管等。 3.方法与结果 3.1 总黄酮的含量测定 以芦丁为标准品，利用紫外分光光度法测定待测样品总黄酮含量。[6~8] 3.1.1 称取芦丁对照品10 mg，用95%的乙醇溶解，摇匀，定容至10 ml，使之成为浓度为1 mg/ml的芦丁标准品溶液，作为贮备液备用。 3.1.2 称取乌拉尔甘草若干，粉碎，过40目筛，称取粉碎样2.0g，置于250ml平底烧瓶，采用乙醇回流法提取（提取溶剂为80%乙醇、液料比为1:20、提取温度为70℃、提取时间为2h、提取2次）。提取液抽滤、转至25ml 3.1.3 乌拉尔甘草含多种黄酮类化合物，其黄酮母核所含的游离羟基在适当的介质条件下能与金属铝离子形成络合物而显色。用一定浓度的亚硝酸钠溶液、硝酸铝溶液、氢氧化钠溶液显色，于450-550nm处扫描，对照品和供试品溶液的吸收光谱均在510nm处有最大吸收，因此测定波长选择510nm。 3.1.4 标准曲线的制备 称取芦丁对照品10 mg，用30%的乙醇溶解，摇匀，定容至10 ml，使之成为浓度为1.00 mg/ml的芦丁标准品溶液，作为贮备液备用。 量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 ml，分别加水至3 ml，加5%亚硝酸钠溶液0.5 ml，放置6 min，加10%的硝酸铝溶液0.5 m1，摇匀、放置6 min后加5%的氢氧化钠溶液2.5 m1，混匀、放置15 min后蒸馏水定容至10 ml,放置15min。用紫外分光光度计在500 nm处测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线。 图1 芦丁标准品标准曲线 3.1.5 供试液总黄酮含量的测定 分别量取待测液1ML置10ML的容量瓶，按标准曲线项下操作显色，测定吸收度，利用吸光度及回归方程计算各样品总黄酮百分含量（T）计算公式为：T=C(mg/ml)*N*V(ml)/W(mg)*100% N为样品稀释倍数；V为提取液定容体积；W为样品质量。 3.2单因素试验与结果 3.2.1乙醇浓度对提取率的影响 准确称取粉碎样2.0g（5份），置于250ML平底烧瓶，分别加入50%，60%，70%，80%，90%乙醇40ml,采用乙醇回流法提取（提取温度为70℃，提取时间为2h，提取2次）。提取液抽滤，转至50ml容量瓶，定容，测定，计算提取率。结果见图2 图2 乙醇浓度对提取率的影响 从图2中可以看出，乙醇浓度为80%时，提取率达到最高。在试验中，随着