冷哮丸对哮喘豚鼠模型作用机制的实验的-研究.pdfVIP

Multiskan BX50F-3 MK，酶标分析仪；722型光栅分光光度计；Olympus 双显微镜(含自动照相装置Nikon 2．2方法 2．2．1动物模型复制 以卵蛋白致敏和攻击复制豚鼠哮喘模型。实验第1天，配制lOOg／L 卵蛋白生理盐水，豚鼠腹腔注射lml卵蛋白生理盐水以致敏；第15天将 致敏豚鼠置于15升透明玻璃罩内，给予1％卵蛋白生理盐水雾化吸入。以 后每隔24h以1％卵蛋白生理盐水诱喘，共4次。正常对照组用同样方法 以等量生理盐水进行腹腔注射及雾化吸入。 2．2．2动物分组 将豚鼠随机分为6组：①正常对照组，②哮喘模型组，③西药对照组 (地塞米松治疗组)，④冷哮丸大剂量组，⑤冷哮丸中剂量组，⑥冷哮丸 小剂量组，每组1o只。 2．2．3实验检测项目 2．2．3．1实验一冷哮丸对哮喘豚鼠气道反应性的影响。①一般情况观察： 包括各组豚鼠的行为、饮食、体重、排便、皮毛及死亡等情况。②乙酰胆 3 碱(Ach)支气管激发试验：于第2d治疗结束后2h，用3％戊巴比妥钠 30mg／kg腹腔注射麻醉，仰面固定于木板上，切开颈部皮肤暴露颈静脉 及气管，用静脉留置针行颈外静脉穿刺置管，行气管切开、气管插管，连 DH-1 40型动物人工呼吸机行辅助通气。每只豚鼠分别给予成倍增加的乙 0、100、200 酰胆碱(o、12．5、25、5 pg／kg)，每次进液量200“l，两 个相邻给药点间隔5min。采用hniRes2 003动物肺功能分析系统连续动态 i 测定呼气阻力(expi ress ratory 与基础的Re比值(以百分数表示)，以Re的变化代表气道反应性。③组 织胺气道反应性测定：豚鼠麻醉后，纵向剪开颈部皮肤及皮下组织，暴露 气管，取中段气管软骨环，剪开形成3mm宽的气管螺旋条。用细线将螺 旋条一端固定于浴槽底部，另一端连与压力换能器。对螺旋条施以2g 的起始张力，平衡1 进行刺激，连续记录气管螺旋条的张力变化。 学的影响。于第23d麻醉动物，分离颈动脉，取颈动脉血lml作白细胞分类 和EOS计数。其余全血离心，取血清，放置一20C低温冰箱中保存待检。对 采血后的豚鼠进行肺泡灌洗，并回收肺泡灌洗液(BALF)，瑞氏染色后 行EOS计数，肉眼及光镜观察豚鼠肺组织形态学变化。 相关试剂盒说明进行操作测定。 2．3统计学方法数据均以；4-s表示，采用SPSSl7．0统计软件进行数据 处理，组间数据比较采用方差分析，尸0．05为差异有统计学意义。 3结果 3．1实验一：冷哮丸对哮喘豚鼠气道反应性的影响 3．1．1一般情况结果：正常对照组豚鼠无任何不适反应，平均体重增加， 毛色光泽。哮喘模型组豚鼠普遍精神较差，活动减少，反应迟钝，进食及 饮水量明显下降，毛色失去光泽，出现不同程度的呼吸次数增加，张口等 呼吸困难症状，在整个喂养过程中体重增加不明显。哮喘模型组1只豚鼠 哮喘严重发作经抢救无效死亡。各用药组豚鼠情况均较哮喘模型组明显改 些 音。 0 3．1．2各组豚鼠在不同浓度Ach激发后Re增长率比较：在Ach浓度为5 00 ug／kg、100“g／kg、2ug／kg时，哮喘模型组Re的增长率与正常对照 组比较，差异有显著统计学意义(尸0．01)。在hch浓度为50“g／kg、 1 与哮喘模型组Re的增长率比较，差异有统计学意义(尸0．05或尸 o．01)。地塞米松治疗组与冷哮丸大剂量组之间，及其与正常对照组之间 Re的增长率比较，差异均无统计学意义(尸o．05)。 3．1．3各组豚鼠气管螺旋条对组织胺的反应性比较：当浴槽中组织胺浓度 o。5-1 达到1 0-3t001／L时，各组豚鼠气管螺旋条产生剂量依赖性收缩。哮喘 模型组豚鼠气管螺旋条张力明显高于正常对照组(尸o．05)。地塞米松治 疗组