Survivin反义寡核苷酸诱导K562细胞株凋亡的实验研究　.docVIP

Survivin反义寡核苷酸诱导K562细胞株凋亡的实验研究 ：李建厂徐酉华贾秀红 】目的探讨Survivin反义寡核苷酸对K562细 胞株凋亡的影响。方法将K562细胞分为四组：反义组、无 义组、脂质体组及空白对照组，通过脂质体将Survivin反 义寡核苷酸转染入各组K562细胞，用免疫组化法测定转染 前后K562细胞Survivin基因及Caspase?3的表达差异， 用Tunel及AnnexinV?F ITC测定各组细胞的凋亡率。结果 Surv iv in基因在K56 2细胞高表达，转染反义核苷酸后其 表达下降，转染Su rvivi n基因反义核苷酸后C aspase?3 的表达较其它各组升高，K 562细胞生长受抑，细胞凋亡率 升高。结论Survivin反义寡核苷酸能够下调Surv ivin基 因的表达，促进白血病细胞株K5 62的凋亡。 关键词】Surviv in反义寡核苷酸K5 62细胞凋亡基 因治疗 [Abst ra ct] Object i veTostudyt heapoptosis ofleukemiac ellsinduce d byantisen se oligonuc leo tidetar geti ngOlig onucl eotid eswere deli veredin the formofco mp lexeswith L ipofectin. K562cellswe redividedin tofourgrou p s:ASONgro up , NSONgro up, lipofec ting roup, a ndcon trolg roup. T heex pressio nof Survivin Ca spse?3was e xaminedbyi mmunohistoc hemistry(SA BC). Anddet e ctedtheap op toticrat eof eachgro upwi thtwom ethod s:Tun elassa yand Annexin V?F ITCThepr ot einofSurv i vinisovere xpressinK56 2cells, buta ftertreate d withantis en seoligon ucl eotide, thel evelof expre ssion wasdow nreg ulation . Af tertrans fe ction,the e xpressiono fcaspase?3o fASONgroupw asupgradec o ntrasttoo th erthreeg rou ps (P) . Thea poptot icrat esdet ectedb yTun elassay and AnnexinV ?F ITCassayo f ASONgroupw ereallhighe rthanothert hreegroups (P) . Concl us ionAntis ens eoligon ucle otidet arget ingSu rvivin cand ownregu lat etheprot ei nexpressi o nofSurvivi n, andcanind uceK562cell stoapoptos i s. [Key wor ds] Surv ivin , antis enseo ligon ucleot ide, K562cel Is, apoptosi s, genethera p y Survivi n是1997年发现的一种新的凋亡抑制基因， 属凋亡抑制蛋白家族(IA Ps),定位于1 7q2 5上，广泛地 表达于胚胎发育组织以及多数人类肿瘤细胞，在正常分化 成熟组织中未见表达［1］。Stir vivin基因在胚胎发育及肿 瘤的发生发展过程中具有重要的作用。研宄表明，用反义 技术下调Survivin基因的表达，能明显抑制肿瘤细胞的增 殖，诱导其凋亡，并促进化疗药物的敏感性［2］。我们以 脂质体作为载体［3］，将S urviv in反义寡核苷酸导入白 血病细胞株K 562，用多种方法检测其凋亡指数，观察Sur v ivin反义寡核苷酸诱导凋亡的作用。 1材料与方法 主要试剂脂质体(Lipofe eta mineTM)购自美国 Invitr ogen公司，Sur vivin山羊抗人多克隆抗体及Ca spa se?3鼠抗人单克隆抗体均由美国San t aCruz公司提 供，Tunel原位凋亡试剂盒由德国Roche公司提供， Annexin V ?FITC凋亡检测试剂盒由晶美生物工程有限公司 提供。 寡核苷酸S urviv in反义寡核苷酸