丙型肝炎临床检验技术发展现状与展望　.docVIP

丙型肝炎临床检验技术发展现状与展望 关键词】HCV抗原检测核心抗原核酸检测技术(NAT) 同时检测 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的一种重要 的世界性传染病［1］，这种病毒主要经由血液传播，也可能 存在其他传播途径如母婴传播、性传播和家庭内接触传播 约有近半数的HCV感染传播途径不明确。丙型肝炎的流行 呈全球性，是欧美及日本等国家终末期肝病的最主要原因 根据WHO统计，全球HCV的感染率约为3°%，估计约2亿人 感染了 HCV，每年新发丙型肝炎病例约有万例。目前尚无治 疗丙型肝炎的疫苗，也没有有效的治疗方法。因此防控丙 型肝炎传染源及阻断传播途径最为有效的手段就是早期准 确诊断并及时发现HCV感染者。从传染源和传播途径两方 面控制丙型肝炎［2］。正因为如此世界各国都在不遗余力地 研究诊断丙型肝炎的新技术。自1989年建立了丙肝病毒抗 -HCV检测方法以来，随着医学检测技术和仪器的不断发展， 丙型肝炎的检测技术一直处于不断发展中。到目前为止， 丙型肝炎检测技术主要有抗-H CV检测、HCV-RNA核酸扩增 检测、HCV核心抗原的检测以及同时检测抗-HCV和HCV核 心抗原4种类型。本文将对丙型肝炎临床检验技术的发展与 畏望做一综述，现报道如下 1抗-HCV的检测 最早出现的HCV检测技术是抗-HCV的检测。由于H CV 在病人外周血液中的含量及病毒抗原的含量很低，这就使 得用常规方法难以直接检测，经过十几年的不断改进和发 展，其检测方法又演变出多种，如:双抗原夹心ELISA、间接 酶联免疫吸附实验(间接ELIS A)、重组免疫印迹法(R IBA)、 蛋白芯片检测法以及免疫层析法。在这些方法之中，重组 免疫印迹法(RIBA)是抗体检测的金标准，蛋白芯片检测法 主要用于抗-HCV的分型。而ELISA由于其操作简单，检测 设备廉价，因此成为应用最广的抗体检测技术。 根据出现时间的先后以及使用抗原的不同，抗-H CV检 测技术可分成三代。第一代抗-HCVIgG试剂盒所用的抗原来 自病毒基因组非结构区(C100)，它的使用使HCV的输血感 染率下降了 80%以上。但其缺陷是:灵敏度较低，抗体检出时 间较晚，敏感性也较高，达到80°%?90 °%,但假阳性较高。 第二代试剂除了包被C100抗原外又加入了 HCV核心区多肽 C22—3和非结构区抗原C33C。抗-C22-3和抗-C33C感染后 出现较早，敏感性和特异性明显提高，感染后8?12周即可 检测。且对HCV的特异性较好，二者联合应用可进一步提高 检出率。第三代HCV抗体ELISA试剂中采用了重组的NSS多 肽，核心区抗原比例相对下降，而相应地增加了非结构区的 NSS区C33C抗原的比例，添加了 NSS区抗原使其敏感性和特 异性得到进一步改善。 上述三代抗-HCV检测方法多采用间接ELISA,虽然也有 过双抗原夹心直接检测抗-H CV的报道［3］,但由于HCV抗原 存在不稳定性，因此至今仍无商品化的试剂盒。目前我国市 售的抗-H CV试剂盒普遍是采用间接法的第三代抗-HCVEL ISA试剂盒和胶体金试剂盒，其特异性可以达到92 %?100%。 但由于各厂家使用的HCV基因重组抗原的质量和各抗原片 段包被比例有所不同，从而使各厂家试剂的灵敏度和特异 性存在一定的差异，导致抗一 H CV检测结果的不一致，产 生漏检和假阳性等［4］，未能解决在正常ALT者和健康献血 者存在的假阳性问题。加上少部分免疫功能不正常的HCV 感染者，则不能检出抗一 HCV。另外，由于“窗口期”的存 在，仍有一定的漏检率［5］。目前抗-HCV的检测方法仍有改 进的潜力，随着对HC V的研究不断深入，更多的HCV蛋白会 被发现，其中新型核心蛋白和外膜蛋白被认为能有效提高抗 -HCV的灵敏度，但其对抗体的检出率依赖于抗原的获得方法， 可能与抗原的构象表位有关［6, 7］。 2HC V-RNA核酸扩增检测技术(Nucleic-ac idAmplificat ionTechnolog yNAT) 从外周血中检出HCVRNA是HCV复制活跃的可靠指标， 在感染2个星期内的血清中可检测到HCVRNA,在感染自然恢 复前血清中HCVR NA将达到一个高峰［8］，目前NAT检测被国 内外部分机构作为HCV感染的确认方法。但HCVRNA在达到 峰值或重新出现前数天或数周内偶尔也可能检测不到［9］。 同时HCVR NA还受进食的影响，易与血中脂质及脂蛋白结合， 降低检出率［10］。因此在一定程度上影响了 NAT检测方法 的完美。另外由于N AT检测技术本身在技术和设备上要求 较高，且耗时、实验步骤较多(其中任何步骤出现问题均影 响其检出)，因此该方法也容易因污染而出现假阳性，难以在 常规工作或基层实验室推广，限制了其应用的