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Chapter 8. 酶的作用机制和调节 酶催化反应的特性. 影响酶催化效率的有关因素. 酶活性的调节控制. 酶催化反应机制实例 酶活性部位的特点和研究方法. 同功酶. 溶菌酶的催化机制的关键要素是： 广义的酸碱催化， Glu35以酸的形式提供质子，它和糖苷键氧原子的距离为0.3 nm，正是合适的作用距离。 正碳离子中间体的形成与稳定，一方面由于Asp52带有负电荷的羧基通过静电相互作用稳定D环中C1的正电荷；另一方面由于D环的变形，由椅式构象变为半椅式，使D环上C1、C2、C5和O都在一个平面上，氧原子的负电性可以使得正碳离子稳定。因此可以说，在结合底物时，酶迫使底物采取了接近于过渡态的构象。 二、丝氨酸蛋白酶(serine proteases) 丝氨酸蛋白酶是一类最有特色的酶家族，包含有胰蛋白酶(trypsin)、胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)、弹性蛋白酶(elastase)、凝血酶(thrmbin)、枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)、纤溶酶(plasmin)、组织纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator, tPA)和其它有关的酶类。 1.消化作用的丝氨酸蛋白酶 Trypsin , chymotrypsin and elastase的结构和作用机制相似，但是专一性明显不同。这三种酶具有相似的顺序。 在胰凝乳蛋白酶中，3个残基—His、Asp和Ser在活性部位能形成熟知的三联体(catalytic triad)。这三个残基在胰蛋白酶和弹性蛋白酶中也存在。酶活性部位位于酶分子表面的凹陷的小口袋中，可用于鉴别酶对于残基的专一性。 三种酶具有相近的分子质量、氨基酸组成以及三级结构 2. Chymotrypsin的动力学研究。 胰凝乳蛋白酶中的Ser-His-Asp催化三联体的构象. 胰凝乳蛋白酶的催化反应依赖于Ser195的异常生理反应。 3. 胰凝乳蛋白酶的催化三联体 4. 丝氨酸蛋白酶的催化机制。 8.5 酶活性的调节控制 主要有别构调控、酶原激活和可逆性共价修饰三类。（浓度调节、激素调节、反馈抑制调节、抑制剂和激活剂的调节、别构调控、酶原激活、可逆性共价修饰和同工酶调节等）。 8.5.1 别构调控(allosteric regulation) 酶分子的非催化部位与某些化合物可逆地非共价结合后发生构象的改变，进而改变酶的活性状态，称为酶的别构调节(allosteri regulation).具有别构调节作用的酶就是别构酶(allosteric enzyme)。 凡能使酶分子发生别构效应的物质称为效应物(effector)，或别构剂，通常为小分子的代谢物或辅因子。 导致酶活性增加的称为正效应物(positive effector)或别构激活剂；反之称为负效应物(negative effector)或别构抑制剂。 1. 天冬氨酰转氨甲酰酶(aspartate transcarbamylase, ATCase) ATCase是嘧啶核苷酸(CTP)生物合成多酶体系反应序列的第一个酶。其正常底物为天冬氨酸和氨甲酰磷酸。 (1) 嘧啶途径的终产物反馈抑制ATCase。 CTP在不影响酶的最大反应速度的情况下，通过降低酶与底物的亲合力来抑制ATCase。抑制程度可达90%。 ATP是ATCase的激活剂，可增强酶与底物的亲和性，也不影响酶的Vmax 。ATP与CTP相互竞争酶的调节部位，高水平的ATP可阻止CTP对酶的抑制作用。它们对酶的调节称为异促效应(非底物分子对酶的激活作用)。 CTP和ATP对ATCase的调节具有两个方面的生理学意义: (1)ATP的信号激活作用；(2)CTP的反馈抑制作用。 (2) ATCase的结构：由催化亚基和调节亚基组成 大的亚基为催化亚基，有催化活性但不与ATP和CTP结合；小的是调节亚基，能与CTP和ATP结合但无催化活性。复合酶含两个催化亚基和三个 调节亚基。 (3) ATCase及其与双底物类似物PALA复合物的三级结构。 ATCase由2个c3部分和3个r2部分组成，其中的一半是c3r3。 原体 ATCase 的活性部位可以氨甲酰基磷酸与Asp结合的过渡态类似物PALA(N-(膦乙酰基)-L-天冬氨酸)与酶的结合来研究。PALA是ATCase的强抑制剂。 (4) ATCase的别构作用通过四级结构的变化来转达 ATCase与底物PALA的结合导致ATCase构象发生变化。 (i)酶结合底物后膨胀； (ii)酶由T型变化为R型。 ATCase的别构效应是在相当大的立体空间范围内起着调节活性的作用。底物的结合和CTP的反馈抑制是通过长距离而传递的。 在ATCase中传递别构效应方面，不同多肽链之间的界面作为分子开关而起着关键作用。