不同途径骨髓基质干细胞移植治疗小鼠糖尿病效果　.docVIP

不同途径骨髓基质干细胞移植治疗小鼠糖尿病效果 ：贾跃伟刘晓萍于业军郭菲菲 】目的研究不同途径骨髓基质干细胞(BMSCs)移 植对小鼠糖尿病治疗效果。方法分离骨髓，贴壁培养并纯 化和扩增BMSCs。腹腔注射链脲佐菌素建立小鼠糖尿病动物 模型。取2X105个第3代BMSCs,对模型鼠分别进行胰腺 内多点注射、尾静脉移植以及肾被膜移植。动态观察移植 后小鼠的血糖、体质量及行为的变化。结果与糖尿病对照 组相比，胰腺移植组、尾静脉移植组和肾被膜移植组小鼠 的糖尿病症状有所改善，血糖明显降低(F=?，q=?，P 关 键词】骨髓祖代细胞;骨髓移植;糖尿病;小鼠 [ABS TRACT]Object iveTostudyth etherapeutic effectsofdif ferentwaysof BMSCstranspl antationondi abeticmice. M ethodsMouseB MSCswereisol ated, culture dandpurified . Amodelofdia betesinmicew ascreatedbyi ntraperitone alinjectiono fstreptozoto cin. About2X1 05BMSCsofthi rdgeneration wereinjected intothepancr eas，caudalve inandrenalca psule. Bloodg lucoselevels，bodyweight, andbehaviorw ereobserveda ftertranspla ntationofBMS Cs. ResultsCo mparedwithth econtrolgrou p, thedia.beti csymptomsoft hosetreatedw ithBMSCstran splantationi mprovedandbl oodsugardecr eased(F=, q=, P［KEYWORDS］m yeloidprogen itorcells;bo nemarrowtran splantation; di abet esmell itus ;mice 目前，传统治疗糖尿病的方法只能减轻症状，但不能 根治，病人一般需要终身治疗，给工作和生活带来了极大 的不便。由于给药过程中病人缺乏理想的血糖感应系统， 常导致全身性代谢紊乱并继发眼、肾、神经、心血管等重 要器官损害。胰岛移植是治愈1型糖尿病最有希望的方法， 但是由于供体不足和免疫排斥反应等问题，始终不能广泛 应用于临床。干细胞具有极强的自我更新能力及多向分化 的潜能，能形成各种组织的早期未分化细胞，是各类疾病 细胞治疗和基因治疗的首选种子细胞［1 ］。骨髓基质干细胞 (BMSCs)取材方便，体外易扩增，不涉及伦理问题，免疫排 斥反应轻，具有向骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、心肌细 胞、神经细胞、胰岛素分泌细胞等多向分化的能力［2?5］。 因此，BM SCs可能成为细胞移植治疗糖尿病的理想的细胞 来源。目前有关干细胞在胰腺内分化的研宄，主要采用尾 静脉移植、肾被膜移植、肝门静脉移植、胰腺内多点注射 进行干细胞移植，其研究侧重于探索干细胞移植后胰腺基 因和蛋白的表达，很少进行功能学方面的研究。本实验重 点对比研究了胰腺内、尾静脉和肾被膜3种途径进行BMSCs 移植对糖尿病的治疗效果。 1材料和方法 材料 取Wistar大鼠10只，体质量为150?200g;取健康昆 明种小鼠25只，2月龄，体质量为35g左右，均来自青岛 市药品检验所。DMEM ?LG培养基购自Gibe o公司；胎牛血清 购自杭州四季青公司；胰蛋白酶购自Sigma公司；链脲佐菌素 (STZ)购自Sigma公司。怡成JPS?5型血糖仪购自怡成生物 电子技术有限公司。 方法 大鼠BMSCs的分离、培养和标记采用颈椎脱臼法将Wi star大鼠处死。在无菌条件下分离出双侧胫骨和股骨，用 D?Hanks液清洗干净，除去骨表面附着组织和两端的骨骺端， 暴露骨髓腔。用含体积分数胎牛血清的DMEM9LG培养液反 复冲洗骨髓腔。将收获的骨髓制成单细胞悬液。调整细胞 密度为1X1010/L，接种于50mL培养瓶中，在37°C、体积 分数、饱和湿度的C02培养箱中培养。24h后换液，除去未 贴壁的细胞，每隔3d换液一次。当细胞达到80%融合时传 代。在第3代BM SCs培养第3天时加10 p L的BrdU溶液 (Br dU50mg,二甲基亚砜mL，双蒸水mL) [6]。 糖尿病动物模型的建立取昆明种小鼠25只，雌雄各半， 给药前禁食12h，按180mg/kg剂量一次性腹腔注射 STZ[7 ]。STZ注射前用pH的mmol/L柠檬酸钠缓冲液配