《绵羊DGAT1基因部分片段的遗传多态性分析方法的建立》-毕业论文.docVIP

PAGE 25 绵羊DGAT1基因部分片段的遗传多态性分析方法的建立 专业：2005级生物技术 姓名： 指导老师： 摘 要 采用PCR-SSCP（聚合酶链式反应-单核苷酸链构象多态性分析）方法分析绵羊的DGAT1基因部分片段的多态性。包括目的基因的提取、纯化、引物设计、PCR、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。建立了检测DGAT1基因多态性的方法。结果显示：该片段上不存在多态性。因此没有必要做遗传平衡定律分析。 关 键 词 绵羊，DGAT1基因，多态性分析，PCR-SSCP ABSTRACT We use PCR-SSCP(polymerase chain reaction - conformation polymorphism - single nucleotide chain analysis) to analysis polymorphism of partial fragments of DGAT1 gene in sheep.It contain extraction and purification, of The primersof gene designing , PCR, Agarose Gel Electrophoresis, Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE). Then we image the results by Gel Imaging System，and alter the photo in order to make picture to propose publish，establish the method which can analysis the polymorphism of DGAT1 gene.The results shows that the segment does not have polymorphism，so there is no need to balance genetic analysis of law. Key Word ： sheep，DGAT1 Gene，Polymorphism analysis，PCR-SSCP 1.前言 二酰基甘油酰基转移酶(DGAT,包括DGAT1、DGAT2和DGAT3)是参与肠道中脂肪吸收、脂蛋白组装、血浆甘油三脂(TG)浓度调节、脂肪细胞中脂肪储存、肌肉能量代谢[1]及乳脂合成、禽蛋及卵母细胞形成等的一种非常重要的微粒体限速酶。据报道[2-4],Dgat-deficient (Dgat-/-)小鼠尽管能存活,但比普通小鼠瘦弱,它可通过增加能量消耗对食物特别是高脂肪饮食诱导的肥胖症产生抗性,其组织TG水平降低,胰岛素和瘦素敏感性以及葡萄糖耐量提高,而且母鼠不能泌乳,因此DGAT基因可能是影响动物生长发育及胴体性状的重要候选基因。此外,过表达DGAT1(二酰基甘油酰基转移酶1)可减少信号脂质(二酰基甘油、磷脂酶等)而合成TG,调节膜脂质和信号脂质的合成,因而在调节细胞生长方面有重要作用[5]。有研究表明,牛DGAT1基因的一个K232A变异位点与产奶性状尤其是乳脂率密切相关,该突变可能就是该14号染色体上影响乳脂率的QTL(数量性状基因座)效应的分子机制[6-9]。目前大多研究者认为,DGAT1基因是影响牛奶乳脂率及脂肪沉积的重要候选基因,在生长发育和肉质性状等的形成中具有重要的生物学功能。 在羊上，主要的研究集中于羊的脂肪沉积和DGAT1基因的活性表达和DGAT1基因的分离鉴定表达与调控的研究是热点。大多数都采用SSCP。RFLP,RAPD等方法分析该基因的多态性，再筛选优势基因进行研究，然后进行定向诱变，加大优势基因的突变频率，产量可大幅提高。 2.实验材料与器材 2.1实验材料 本试验所用的样品为绵羊的全血，样本数量为4份，采取颈静脉采血，用肝素钠抗凝后，采样后立即编号，迅速做DNA的提取。 2.2主要仪器和设备 (1)凝胶数字成像系统：Bio-Pro型，西盟国际公司(2)电泳仪：北京六一仪器厂(DYY-1L),Biometra公司（２xT5AH） (3)电泳槽：Biometra公司 (4)PCR仪：Biometra公司 （5）微型离心机：Thermo公司 （6）电热恒温水浴锅：DK-S26型，上海精宏实验设备有限公司 （7）多功能水域恒温振荡器：SHA-D型，江苏正基仪器有限公司 （8）旋涡混合仪：XW-80A型，海门市其林具而仪器制造有限公司 （9）立式电热压力蒸汽灭菌锅:LDZX-50KBS型，上海申安医疗器械厂 （10）制冰机：SIM-F140型，SANYO公司 （11）超纯水设备：Sarto