《H1N1SIV（猪流感病毒）HA蛋白的生物信息学分析、高效可溶表达及鉴别诊断SIV的夹心ELISA..docVIP

H1N1 SIV （猪流感病毒）HA蛋白的生物信息学分析、高效可溶表达及鉴别诊断S1V的夹心ELISA方法的建立 猪是流感病毒传播的中间宿主，猪感染猪流感病毒（SIV ）后 会导致其他疾病如蓝耳病、圆环病毒病、胸膜肺炎等疾病的发生，给 畜牧业造成巨大的经济损失，对人类健康造成了严重威胁。快速诊断 和及时监测是控制流感的首要步骤。H1N1亚型猪流感病毒（SIV） 的血凝素（HA）基因在流感病毒传染的过程中与识别靶细胞表面受体 在穿膜过程中起重要作用，刺激机体产生的中和抗体可以抵抗病毒感 染。本论文采用RT-PCR方法扩増了 H1N1亚型猪流感病毒（SIV ） 广东株的血凝素（HA ）基因，测序后对HA基因进行生物信息学分 析，分析结果表明HA蛋白具有良好的免疫原性，可以作为诊断试剂。 然后将HA基因克隆到高效可溶表达载体pBCX上，成功构建重组表 达质粒pBCX-HA。将其转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中表 达，SDS可检测到分子量约为94.0ku的融合蛋白，通过薄层 凝胶扫描分析表明表达产物占菌体总蛋白的29.5%。经蛋白可溶性分 析看出，融合蛋白90%以上是以可溶形式表达的。Western-blot证实， 可溶表达的融合蛋白与H1N1亚型猪流感病毒阳性血清具有良好的 免疫反应性。纯化表达的HA融合蛋白作包被抗原用于猪流感病毒单 克隆抗体的筛选，筛选到2株猪流感病毒