深海来源低温诱导表达载体pSW4的构建及其应用.PDFVIP

微生物学通报 Apr. 20, 2017, 44(4): 983−990 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160369 生物实验室 深海来源低温诱导表达载体pSW4 的构建及其应用 * 程瑞雪 蹇华哗 许冠鹏 王风平 ( 200240) 摘 要：【目的】在深海来源穿梭载体pSW2 的基础上构建低温诱导高效表达载体，为最终获 得环境污染物高效降解菌提供基础和工具。【方法】通过最小化敲除实验确定载体必需基因， 以绿色荧光蛋白 GFP 为报告基因检测载体的表达能力变化，进一步添加纯化标签、多克隆位 点及替换启动子等改造获得低温诱导表达载体pSW4 。【结果】敲除实验结果显示编码单链结合 蛋白的基因fpsB 敲除后载体的表达效率显著提高。以 GFP 为报告基因检测发现，pSW4 的表 达效率较pSW2 有显著提升(4 °C 条件下提高10.7 倍) 。以深海细菌Shewanella piezotolerans WP3 为宿主菌，应用pSW4 为表达载体表达深海细菌Shewanella psychrophila WP2 的聚合酶亚基， 检测显示其在Mg2+条件下具有切割单链DNA 的核酸酶活性，而在Mg2+或Mn2+条件下具有切 割双链DNA 的核酸酶活性。【结论】构建了低温诱导表达载体pSW4 ，并证实了其适用性，有 助于今后构建环境修复菌及相关的应用性研究。 关键词：低温诱导，载体构建，深海细菌，环境污染修复 Construction of cold inducible expression vector pSW4 and expression of DNA polymerase III epsilon subunit CHENG Rui-Xue JIAN Hua-Hua XU Guan-Peng WANG Feng-Ping (State Key Laboratory of Microbial Metabolism, School of Life Science and Biotechnology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China) Abstract: [Objective] Deep-sea derived shutter vector pSW2 has been constructed previously. In this study, a cold inducible expression vector was constructed based on pSW2 to provide useful explant materials and toolbox for the construction of an engineered strain that can degrade environmental pollutants. [Methods] Mutation experiments were performed to identify essential gene in the vecto