可乐中咖啡因的高效液相色谱法测定-基础化学中心.PPTVIP

可乐中咖啡因的高效液相色谱法测定 实验化学四 （综合化学实验） 色谱法简介 混合物随流动相流经色谱柱时，由于个不同组分与固定相的相互作用强弱不同，从而使各组分按先后不同的顺序依次从固定相中流出。 这种利用个组分在两相中具有不同分配系数或吸附系数，使混合物中各组分分离的技术称为色谱法。 作用：分析 分离 流动相：携带样品流过固定相的流动体 固定相：固定不动的一相 按流动相的物态分： 气相色谱 液相色谱 高效液相色谱：在技术上采用了高压泵，高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化。 高效液相色谱的分类： 液—液分配色谱法载体 全多孔型 表面多孔型 化学键合固定相：用化学反应的方法把有机分子结合到载体表面。（如实验所用的C18即十八烷基键合硅胶） 反相色谱优点： 能和水兼容 高效，稳定 适用于大部分物质，应用非常广泛 常被用于从极性溶液中或水相中萃取非极性物质 分析方法： 定性：根据保留值或与其相关的制进行判断，以确定各色谱峰代表何组分 定量：检测信号（峰面积、峰高等）大小与组分的量成正比关系 标准曲线法 归一化法 内标法 实验目的 了解液相色谱仪的基本结构和操作； 了解反相液相色谱法的原理、优点和应用； 掌握标准曲线定量方法。 咖啡因又称咖啡碱，化学名称为1，3，7- 三甲基黄嘌呤，分子式为C8H10O2N4，属黄 嘌呤衍生物，是一种可由茶叶或咖啡中提 取而得的生物碱。它能兴奋大脑皮层，使 人精神兴奋。咖啡中含咖啡因的质量分数 约为1.2％~1.8％，茶叶中约含2.0％~ 4.7 ％，可乐饮料、APC药品等中均含咖啡因。 主要仪器与试剂： 1. 色谱仪: Pro Star210（Varian） 2. 色谱柱：C18柱， 200 mm×4.6 mm 3. 流动相: 甲醇:水(60:40)， 流速: 1.0 mL/min 4. 检测器: 紫外检测器 UV345 检测波长：275nm 实验步骤： 1. 配制系列标准溶液：40、60、80、100、120μg/ml ；(140μg/ml不用配制） 2. 样品处理：可口可乐、百事可乐干过滤后（弃去前滤液）取25ml用氯仿萃取（加饱和NaCl和NaOH溶液），脱水过滤配成50ml溶液； 3. 制作工作曲线：基线平稳后分别进样标准系列溶液5μL，重复一次，纪录峰面积和保留时间； 4. 样品测定：将配好的样品分别用0.45μm的滤膜过滤后，进样5μL ，根据保留时间确定咖啡因色谱峰并记录其峰面积； 5. 结束试验：清洗所用各仪器，关液相色谱仪及计算机。 数据处理： 1.根据标准系列溶液的色谱图，绘制咖啡因峰面积与其浓度的关系曲线； 2.根据样品中咖啡因色谱峰的面积，由工作曲线得出两种可乐中咖啡因含量。 思考 1、 若标准曲线用咖啡因浓度对峰高作图，能给出准确结果吗？与本实验的标准曲线相比何种优越？为什么？ 2、在样品干过滤时，为什么要弃去前过滤液？这样做会不会影响实验结果？为什么？ 3、请设计测定茶叶中的咖啡因时样品的处理方法。 开 始 实 验 ！ * * 基础化学实验中心 流动相为液体的色谱技术 高 效 液 相 色 谱 液—液分配色谱法 离子交换色谱法 液—固分配色谱法 空间排阻色谱法 流动相极性 固定相极性：正相色谱法 流动相极性 固定相极性：反相色谱法 固定相为依附在载体上的液体 固定相为吸附剂 凝胶渗透色谱法（GPC） 高效液相色谱仪流程示意图 主 要 问 题