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分别进行SDS．PAGE和Weestnblot分析。确定表达后对诱导条件进行优化，并
确定融合蛋白表达部位。其后大量诱导VEGFl65融合蛋白表达，收集、洗涤包
FF16／10亲和层析柱以
涵体，以8mol／L尿素溶解后复性，将复性液经过HisPrep
亲和层析的方法获得纯化的VEGFl65融合蛋白。
段实际大小与理论大小基本一致。测序结果也表明，重组表达质粒中VEGFl65
目的基因片段的核苷酸序列完全正确，阅读框架无误，重组表达质粒构建成功。
表达工程菌诱导表达产物的SDS．PAGE分析表明，诱导表达产物中均有相应的
VEGFl65重组融合蛋白表达，其表达水平较高，并为包涵体表达。进一步的经
Western
合，确实为我们要表达的目的蛋白。确定了最适宜的表达条件为：0．5mmol／L
FF
16／10亲和层析柱亲和层析
IPTG，37℃，诱导时间4~5h。表达产物经HisPrep
可分离纯化得VEGFl65融合蛋白。
E．coli
下一步大量制备VEGFl65目的蛋白，研制vEGF单克隆抗体，及研究其抗肿瘤作用
奠定了基础。
关键词：VEGF基因原核表达基因克隆蛋白表达亲和层析
2
‘
of’olIIIImanvascularvascUlarenotllellal
E ，，lrification
purification
factor
growth165(VEGFl6s)fusionprotein
Abstract
itsattack
tumorhas detrimentto health．And
objective：Malignantgalactic people’S
rateisadscendent andmetastasis on
year growth largelydepend
byyear．Tumor
in
andthevascularendothelial acriticalrole
angiogenesis growthfactor(VEGF)play
ofVEGF
tumor-associated ifinhibitthe transductionmay
angiogenesis．So signal
and to
inhibit inhibittumor metastasis．We
angiogenesis，thatmay growth plan
construetheinducible recombinant vectors，and
His—VEGFl65 prokaryoticexpression
inducethe
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