南美白对虾肝肠胞虫的分离及形态学观察-中国水产科学.PDFVIP

中国水产科学 2018 年9 月, 25(5): 10511058 Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 DOI: 10.3724/SP.J.1118.2018.17430 南美白对虾肝肠胞虫的分离及形态学观察 乔毅, 沈辉, 万夕和, 范贤平, 蒋葛, 黎慧, 王李宝, 史文军, 成婕 江苏省海洋水产研究所, 江苏 南通 226007 摘要: 为了研究江苏地区感染南美白对虾(Penaeus vannamei) 的肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP) 的形态 学特点, 分析与国外报道的差异性, 本研究以江苏地区感染肝肠胞虫的南美白对虾肝胰腺组织为研究材料, 通过 蔗糖密度梯度离心等方法进行肝肠胞虫初步分离纯化, 构建一种肝肠胞虫荧光染色检测方法, 显微观察肝肠胞虫 的孢子形态结构。结果发现感染江苏地区南美白对虾的肝肠胞虫孢子主要分布在35%~40%浓度的蔗糖层面, 可推 算其密度为 1.15~1.17 g/mL。荧光显微镜下可见孢子椭圆或圆形, 呈亮蓝色, 孢子微小但可计数, 显微观察可见肝 肠胞虫孢子大小约为 1.7 μm×0.9 μm, 外壁上有大量白色瘤状物, 疑似胞壁蛋白, 孢子表面布满细小褶皱, 孢子具 有一个细胞核, 极丝4~6 圈, 细胞壁由一相对薄的电子透亮的孢子内壁和电子致密的孢子外壁组成。结论认为江苏 地区南美白对虾肝肠胞虫的形态结构与国外报道的吻合, 本研究建立的肝肠胞虫分离纯化、荧光染色方法以及取 得的肝肠胞虫形态学资料可为其检测和研究提供参考。 关键词: 肝肠胞虫; 分离纯化; 形态学; 荧光增白剂28 中图分类号: S945 文献标志码: A 文章编号: 10058737(2018)05105108 肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP) 了详细的研究和描述, 并正式命名为 Enterocytozoon 是近些年发现的一种主要寄生在虾类肝胰腺肝小 hepatopenaei 。Sritunyalucksana 等[4] 曾告诫亚洲对 管上皮细胞内的微孢子虫。2003 年泰国斑节对虾 虾养殖人员和孵化场经营者要监测EHP 病原, 但 (Penaeus monodon)养殖过程中出现了严重的生长 是由于人们过多地关注对虾急性肝胰腺坏死疾病 缓慢综合征(Monodon slow growth syndrome, (acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND), MSGS), 造成的损失可与对虾白斑综合征病毒暴 EHP 并没有引起足够的重视。2013 年 Tangp- [1] [2] rasittipap 等[7]发现 EHP 感染南美白对虾(Penaeus 发带来的影响相当 , Chayaburakul 等 进行组织 病理学研究, 在多个器官中发现疑似病原, Anan- vannamei), 并且可以通过摄食病虾进行水平传 [3] [4] 播。后来, EHP 在中国、印度尼西亚、马来西亚、 tasomboon 等 和 Sritunyalucksana 等 在淋巴器 官中发现球状体和多种病毒, 在受影响的肝胰腺 越南、泰国和印度等亚洲南美白对虾重要养殖国 细胞中有时能检测到单核杆状病毒和肝胰腺细小 家大面积暴发[7-11] 。EHP 主要感染斑节对虾和南 病毒以及一种未知的微孢子虫。Tourtip 等[5-6]研究 美白对虾, 感染后一般不引起对虾死亡, 主要表 发现引起斑节对