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鄂柑一号崭躺俸搜勘涞AFLP剖析 　　摘要：利用ＡＦＬＰ技术，对鄂柑一号?崭蹋ǎ茫椋簦颍酰? ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ Ｂｌａｎｃ． ｃｖ． ｐｏｎｋａｎ）的３个少核芽变及其母株进行分子鉴定。筛选了６４对引物，有６０对引物可扩增出清晰的条带，共获得２ ２８１条清晰的扩增谱带，其中有９对引物可扩增出明显多态性条带，多态性位点共１５个，占总数的０．６６％。结果表明，鄂柑一号?崭痰纳俸搜勘溆梢糯?物质改变引起，通过ＡＦＬＰ技术可以有效鉴定。 　　关键词：?崭蹋ǎ茫椋簦颍酰? ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ Ｂｌａｎｃ． ｃｖ． ｐｏｎｋａｎ）；芽变；ＡＦＬＰ 　　中图分类号：Ｓ６６６．１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）17－3556-03 　　 　　Identification of Three Few-seed Mutant from E-Gan No.1 by AFLP 　　 　　ＸＵ Ｍｉａｏ，ＪＩＡＮＧ Ｙｉｎｇ－ｃｈｕｎ，ＳＵＮ Ｚｈｏｎｇ－ｈａｉ，ＷＵ Ｌｉ－ｍｉｎｇ，ＴＯＮＧ Ｚｈｕ，ＷＡＮＧ Ｚｈｉ－ｊｉｎｇ，ＨＥ Ｌｉ－ｇａｎｇ 　　（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｆｒｕｉｔ ａｎｄ Ｔｅａ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｗｕｈａｎ ４３０２０９， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｒｅｅ ｆｅｗ－ｓｅｅｄ ｂｕｄ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｍｏｔｈｅｒ ｐｌａｎｔ ‘Ｅ－Ｇａｎ Ｎｏ．１’ ｐｏｎｋａｎ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｅｄ ｂｙ ＡＦＬＰ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ． ６４ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｒｉｍｅｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ａｎｄ ２ ２８１ ｃｌｅａｒ ｂａｎｄｓ ｗｅｒｅ ａｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ６０－ｐａｉｒ－ｐｒｉｍｅｒ， fｒｏｍ ｗｈｉｃｈ ９－ｐａｉｒ－ｐｒｉｍｅｒ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｒｅｓｅａｃｈ. Aｎｄ １５ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｂａｎｄｓ ｗｅｒｅ ｄｅｃｔｅｃｔｅｄ ｏｕｔ ｏｆ ２２８１ ｔｏｔａｌ ｃｌｅａｒ ｂａｎｄｓ； ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｒａｔｅ ｗａｓ ０．６６％． Ｔｈｉｓ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｓｏｍｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｌｅｖｅｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｅ-ｇａｎ Ｎｏ．１ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｆｅｗ－ｓｅｅｄ ｂｕｄ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ； aｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｅｄ ｂｙ ＡＦＬＰ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｂｕｄ ｓｐｏｒｔ； Ｃｉｔｒｕｓ ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ Ｂｌａｎｃ． ｃｖ． ｐｏｎｋａｎ； ＡＦＬＰ 　　 　　鄂柑一号是湖北省农业科学院果树茶叶研究所从?崭淌瞪?苗中选出的新品种［１］，是?崭讨械囊桓鲇帕嫉南适称分郑?具风味浓厚、抗寒性强及耐贮藏等优点，但果实种子偏多。进行鄂柑一号的少核育种研究可以提高其经济效益。近年来我们发现了鄂柑一号的３个少核芽变，其所结果实的种子明显少于母株果实，经过几年高接试验，其少核性状比较稳定。但是否为遗传物质芽变引起，仍然不能肯定。 　　近年来发展起来的ＲＡＰＤ、ＡＦＬＰ、ＩＳＳＲ、ＭＳＡＰ等分子标记技术可以在芽变早期快速鉴定遗传物质是否发生改变［２－５］。在这些分子标记技术中，ＡＦＬＰ不仅具备其他分子标记的优点，而且在操作过程中用样量少、灵敏度高，且带纹丰富，对于鉴定多态性低的芽变较为适合。 　　试验以鄂柑一号的３个少核芽变为材料，利用ＡＦＬＰ技术分析芽变材料及其母株，旨在早期从分子水平鉴定鄂柑一号的少核芽变，缩短育种周期，提高鄂柑一号少核芽变的选种效率。 　　１材料与方法 　　１．１试验材料 　　供试材料来自湖北省农业科学院果树茶叶研究所柑橘资源圃。鄂柑一号及其３个少核芽变：金优－Ｉ、金优－ＩＩ、金优－ＩＩＩ，３个少核芽变于２００６年高接在成年温州蜜柑树上，树体健壮，正常田间管理。试验随机采取供试树体外围的幼嫩叶片，每株进行３次重复，液氮速冻后置于－８０ ℃冰箱保存备用。 　　１．２ＤＮＡ提取 　　ＤＮＡ提取采用改进的ＣＴＡＢ法［６］。ＤＮＡ的纯化按照ＴａＫａＲａ公司的纯化试剂盒说明进行，琼脂糖凝胶电泳检测ＤＮＡ。 　　１．３ＡＦＬＰ分析 　　引物及接头序列参照Ｖｏｓ等［７］的ＡＦＬＰ技术体系，由上海生物工程技术服务有限公司合成，具体见表１，其中Ｅ和Ｍ分别表示ＥｃｏＲⅠ引物和ＭｓｅⅠ引物。 　　酶切反应体系２０ μＬ，采用ＥｃｏＲⅠ引物和ＭｓｅⅠ两种内