日本酚氧化酶的分离纯化及其部分生物化学性质研究-海洋科学.PDF

研究报告 　R E P OR TS 日本 酚氧化酶的分离纯化及其部分生物化学性质研究 杨玲玲 ,樊廷俊 ,丛 日山 ,汤志宏 ,孙文杰 ,刘光兴 ,孟祥红 ,朱丽岩 ( 中国海洋大学 生命科学与技术学部 海洋生物系 , 山东 青岛266003) 摘要 :利用离子交换层析和凝胶过滤层析等方法 ,从 日本 ( Cha ry bd is j ap onica) 血淋巴中分离纯化出了酚氧 ( ) 化酶 ,并以L二羟苯丙氨酸 LDO PA 作为特异性底物对其生化性质和酶性质进行了研究 。结果表明 ,酚氧 化酶和酚氧化酶原的分子质量分别为 64 . 5 ku 和 69 . 5 ku 。以LDO PA 为底物对酚氧化酶纯品进行研究发 现 ,其最适 p H 值为 6 . 0 、最适温度为 40 ℃。对底物 LDO PA 和儿茶酚的米 氏常数 Km 值分别为 3 . 4 1 和 7 . 97 mmol/ L 。该酶对亚硫酸钠 、苯硫脲极为敏感 ,对硫脲 、苯甲酸非常敏感 ,表明该酶很可能是一种儿茶酚 酶型的酶 。此外 , ED TA ,D E TC ,Zn2 + ,Mg2 + 和 Cu2 + 均能显著抑制该酶活性 ,且 10 mmol/ L Cu2 + 能有效地回 复该酶被 D E TC 所抑制的酶活性 ,表明该酶确为一种 Cu金属酶 。 关键词 : 日本 ( Cha ry bd is j ap onica) ;酚氧化酶 ;LDO PA (Ldihydroxyp henylalanine) ;儿茶酚酶 ;金属酶 中图分类号 :Q55 　　　　　文献标识码 :A 　　　　　文章编号 (2008) ( ( ) ) 　　酚氧化酶 p henolo xida se 简称 PO , E. C. 1. j ap onica 的酚氧化酶 ,并对其生化性质和酶学性质 ) ( ) 10 . 3 . 1 作为酚氧化酶原 p ro PO 的活性形式 ,是在 进行系统研究 。 无脊椎动物非特异性免疫 中起关键作用 的一种 [ 1 ,2 ] 1 　材料与方法 酶 。例如 ,酚氧化酶可能通过一个类似于硫羟酸 酯的基团结合到受感染的细胞表面并产生有毒性的 1 . 1 　材料 ( ) 中间产物 ———酚 ;在 Taura 综合征病毒 T SV 感染 海捕 日本 (体长约 8 cm) 购于青岛南山水产品 [3 ] 的对虾中 ,酚有助于宿主抵抗病毒入侵到体腔中 。 市场 。 目前已知 ,proPO 激活系统的级联反应能够参与无脊 椎动物血淋巴中的免疫应答并产生黑色素[ 1 ,2 ] 。研 1 . 2 　方法 究表明昆虫和海洋贝