3αHSDCR和aiiA双基因融合表达载体的构建和表达.docx

PAGE PAGE 5 1 前言 随着工业化的发展，大量的化学物质通过废水、废气、废渣、农药等多种途 径排放到环境中，造成了严重的环境污染，特别是由洗涤剂、农药及塑料工业等 向环境排放的物资及其降解产品，能够产生一系列环境内分泌干扰素（EEDs）， 种类多达百种[1-3]。这些物资在环境中化学性质稳定，可长期存在。大多数物资 可在机体内长期蓄积。脂肪组织是其蓄积的主要场所。在环境保护和食品安全意 识日益高涨的今日，人们对环境修复和减少使用农药的要求日益强烈[4-7]。越来 越多的调查表明，一些癌症（如：卵巢癌、睾丸癌和乳腺癌等）、生殖障碍、发 育异常（儿童身体与精神发育障碍）与环境内分泌干扰物的分布水平密切相关。 据报道，全世界每年因使用化学农药而中毒的约有 200 万，其中大约有 4 万人死 亡。长期大量使用化学农药使得农药残留严重，污染了环境也对人体的健康带来 潜在威胁。因此，大力开展环境生物修复和生物防治害虫具有重要的意义[8-11]。 1995 年 Minnesota 学生发现畸形青蛙，接着出现了多次的不同地区同类型报 道，引起世界震惊[12]。环境内分泌干扰物不仅危害水体生物，对人类最明显的 危害是生殖机能的下降[13-15]。最近 50 年间，不育或者不孕夫妇的比例到达了 10%-15%。世界许多地区人群血液中检测出环境内分泌干扰物。体内有机污染物 来源复杂，但是内分泌干扰物主要的吸收途径为食物和饮料[16,17]。 对的研究，已成为环境毒理学和环境医学等多学科交叉的研究热点，发达国 家如美国、英国已制定了环境内分泌干扰物国家研究计划，世界卫生组织也呼吁 世界各国关注环境内分泌干扰物的研究[18]。我国已把环境内分泌干扰物研究列 为“863”重大课题之一。 在生物技术领域里，很大一部分是关于利用微生物进行环境修复和微生物杀 虫剂的研究。 睾丸酮丛毛单胞菌（Comamonas testosteroni）是革兰阴性杆菌，能够以各种 类固醇化合物作为唯一的能源和碳元，通过一系列涉及复杂代谢途径的诱导酶的 作用，最终可以将这些稳定的化合物降解为 CO2 和 H2O。同时，该菌还能降解 一些非类固醇类的化合物，如：氯乙烯降和苯酚[19-21]。 苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,简称 Bt）是革兰氏阳性土壤杆菌， 其形成芽孢的同时在菌体内形成具有蛋白质性质的一个或多个伴孢晶体，又称杀 虫晶体蛋白，对害虫有较强的毒杀作用，而对人和家畜无毒、不污染环境、不产 生抗药性等优点，因而在全球农、林、卫生害虫防治中得到广泛应用[22-27]。 1. 1 睾丸酮丛毛单胞菌的研究概况 睾丸酮丛毛单胞菌（C. testosteroni）是严格需氧、非发酵的可利用类固醇作 为唯一碳源的细菌。该菌在自然界中分布非常广泛，尿液、人的血液、水体、呼 吸道分泌物、食品唾液和土壤等样品都可以分离到该菌[28-30]。该菌不仅能够以类 固醇化合物作为唯一的碳源和能源，如胆汁酸、睾丸酮等，完全降解这类底物， 还能使一些致癌的多环芳烃类物质(PHAs) 失活[31]。同时，该菌降解一些非类固 醇类异型生物质，如：对硝基苯甲醛（p-nitrobenzaldehyde）、甲吡（metyrapone） 等。该细菌的一些有益基因不断被分离出来、并深入研究了其作用机理和调控模 式等[32-36]。因此，如何合理开发利用睾丸酮丛毛单胞菌（C. testosteroni）进行环 境生物修复具有十分重要的意义。 1. 1. 1 类固醇化合物 1.1.1.1 类固醇种类 类固醇包括胆汁酸和胆汁醇，类固醇激素，固醇等。此外还有类固醇药物 和口服避孕药等一些化学合成的工业产品。其中胆汁酸和胆汁醇是胆固醇的降解 产物。类固醇激素包括性激素和肾上腺皮质激素。固醇包括植物固醇，动物固醇， 酵母固醇。 1.1.1.2 类固醇在环境中的降解途径 在环境中的降解途径主要有微生物降解，光降解，自然环境吸附等。有研究 表明微生物能够以类固醇作为能源进行降解，但是降解机理有待进一步研究。光 降解是污染物自身吸收阳光在环境中的一些催化剂的作用下降解[37]。光降解是 一种环保，有效的新型处理污染物的手段，对光降解的研究已经成为一个研究热 点。类固醇在环境中会被环境中的固体颗粒吸附，从而稀释了它的浓度[38-40]。 1.1.2 羟类固醇脱氢酶（HSDs）的特性 羟类固醇脱氢酶（Hydroxysteroid dehydrogenases, HSDs）存在各种细胞中， 通过催化非活性代谢物和活性之间的酶化转化反应来参与调节类固醇激素水平。 由于活性和非活性的类固醇之间的平衡决定了达到目标组织里的受体的信号数 量，因此羟类固醇脱氢酶对类固醇的酶化修饰在类固醇介