纯钛表面酸蚀加碱热处理后对鼠成骨细胞黏附增殖的影响-口腔临床医学专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2012 届硕士学位论文 纯钛表面酸蚀加碱热处理后对鼠成骨细胞黏附增殖的影响 专 业： 口腔临床医学(口腔修复方向) 研究生： 田 俊 导 师： 王 永 教 授 张 磊 教 授 摘要:目 的：通过体外培养乳鼠成骨细胞建立细胞系,检测鼠成骨细胞在经 四种不同方法处理后钛片表面的附着、增殖及活性;对比研究钛片常规单一处理 与复合处理的区别,探讨酸蚀加碱热钛植入材料表面处理的可行性。方法：采用 新生 SD(24 小时内)大鼠颅盖骨培养成骨细胞;倒置相差显微镜和苏木精伊红染 色(HE),观察鼠成骨细胞形态;并对培养的细胞进行碱性磷酸酶染色(ALP)和茜素 红矿化结节细胞化学染色鉴定。取体外培养的第四代鼠成骨细胞用于各项实验。 实验分为四组：光滑组、碱热组、酸蚀组及酸蚀加碱热组，每组钛片各 30 例。 用扫描电镜观测实验前各处理组钛片表面形态及实验中鼠成骨细胞在钛片表面 的生长情况。用血球计数板计数 1 天、2 天、3 天、6 天、7 天各处理组钛片表 面的细胞数，以监测细胞的生长曲线;用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT 法)测定在不同时间点细胞的增殖情况，以碱性磷酸酶试剂检测盒检测细胞的活 性。结果：鼠成骨细胞在四种不同处理组钛片表面均能较好的附着，且生长情况 良好，其生长曲线与体外培养成骨细胞的生长曲线基本一致；在细胞增殖测试中， 培养早期（1、2 天）测得的各组细胞密度没有明显差别（P＞0.05）；培养 3 天 后，酸蚀加碱热处理组的细胞密度明显高于光滑组和碱热组（P＜0.01），略高于 酸蚀组（P＜0.05）。在 ALP 活性检测中，在 3 天和 6 天 两个时间点上，四组之 间 ALP 活性都有统计学意义（P＜0.05）,各处理组 ALP 活性大小依次为:酸蚀加 碱热组〉酸蚀组〉碱热组〉光滑组。结论：体外培养的鼠成骨细胞均能在四种不 同处理的钛片表面附着、增殖且均有 ALP 活性，但酸蚀加碱热组更有效的提高成 骨细胞的早期粘附、增殖及 ALP 活性；因而推测酸蚀加碱热处理优于单一处理法， 可应用于钛植入材料的表面处理。 关键词：成骨细胞 酸蚀加碱热法 纯钛 粗糙度 1 前 言 种植义齿是以牙种植体为支持、固位基础所完成的一类缺牙修复体。随着口 腔种植技术发展逐渐成熟,口腔种植义齿逐渐成为修复牙列缺损、牙列缺失有效 的手段之一，特别是解决了游离缺失或全口牙缺失修复的固位支持，较好地恢复 了咀嚼、美观及发音功能，被誉为人类第三副牙[1]，该修复方式因而广泛应用于 口腔临床。但钛种植体目前仍存在许多问题，如生物活性差，缺乏骨诱导作用， 骨结合强度低，金属离子释放，愈合时间长以及耐磨、耐腐蚀性差等。因此，对 钛金属表面进行改性使其表面具有生物活性，从而能够与骨组织形成生物性结 合，成为口腔种植材料研究的热点之一[2]。 种植体植入后,种植体能否种植成功与早期骨整合能否形成密切相关。种植 术完成后,能否促使钛种植体与人体体液及组织相互作用, 并在种植体表面产生 骨接合, 是种植体能否产生良好生物相容的关键。Le Gu′ehennec[3]将骨整合 (osseointegration)定义为直接使骨种植体在无结缔组织层干扰的情况下与骨 接触。骨整合是比牙龈软组织的结合更为重要的一种生物固定, 是义齿种植体种 植成功的关键，具有分散功能性负重的能力，并且不会对邻近组织及全身产生不 利影响。如何获得这种理想的骨结合界面？其影响因素很多，目前研究认为主要 与种植体材料特性、成骨细胞功能、种植体表面处理的选择等有关。 在其它条件相同的情况下，学者们对口腔种植体的研究是围绕钛金属展开 的。研究表明，钛金属（titanium）是一种具有高度化学活性的金属, 耐腐蚀性、 稳定性高，但其表面极易氧化而形成惰性的氧化膜，因而能与机体形成良好而稳 定的生物相容关系，为相当理想的生物性种植材料[4]，因而广泛用于临床。 然而临床上,一个种植体手术的成功与否与诸多因素有关,随着对种植材料 的深入研究，学者们发现，粗糙表面具有更好的骨诱导性，种植体与周围骨组织 结合更牢固，种植长期效果优于光滑表面种植体［5-6］。目前，通过各种表面改性 方法处理后的种植体均为粗糙面种植体材料本身的性能,尤其是其界面的生物性 能尤为关键[7]。对于目前临床常用的纯钛种植体而言,纯钛材料表面的氧化层直 接与活体组织接触,界面性能主要是指这层氧化层与生物体相互作用的性能。因 此,可以推论,在纯钛材料表面形成具有生物活性的氧化层则应该可以提高植入 材料的生物学性能[8] 。 2 表面粗化技术是研究较多并已用于临床的钛表面处理技术之一, 种植体 表面粗化后会形成类似窝洞样的结构, 这无疑对骨组织的锚定有重要的作用[9]。 Martin[10]等人也认为粗糙