丹皮酚对人肝癌细胞株HepG2药物转运体表达及功能的影响-药物化学专业论文.docx

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照表 英文缩写 英文全称 中文名称 DMSO FBS PBS DCF PhA CDFDA qRT-PCR CCK8 BCA mRNA cDNA Dimethylsulfoxide Fetal bovine serum Phosphate buffered saline 2,7-Dichlorofluorescein Pheophorbide A 5-(and-6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluor escein diacetate Quantitative real time polymerase chain reaction Cell Counting Kit-8 bicinchoninic acid Message ribonucleic acid complementary DNA 二甲基亚砜 胎牛血清 磷酸盐缓冲液 二氯荧光素 脱镁叶绿酸盐 A 二氯乙酸钠 实时荧光定量聚合酶链 式反应 细胞计数试剂盒 二金鸡纳酸 信使 RNA 互补脱氧核糖核酸 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 TBST Tris-Buffered Saline and Tween 20 氨丁三醇吐温缓冲液 PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 WB Western blot 蛋白质免疫印迹法 PVDF poly vinylidene fluoride 偏聚氟乙烯 ECL Enhanced chemiluminescence reagents 增强型化学发光试剂 HRP Horseradish Peroxidase 辣根过氧化物酶 KD Kilodalton 千道尔顿 s Second 秒 min Minute 分钟 h hour 小时 1 μL Microlitre 微升 mL Millilitre 毫升 nM Nanomole 纳摩尔 μM Micromolar 微摩尔 μg Microgram 微克 μm Micrometer 微米 bp Base pair 碱基对 Ctrl Control 对照 2 丹皮酚对人肝癌细胞株 HepG2 药物转运体表达及功能 的影响 摘要 丹皮酚（Paeonol，Pae）是毛茛科植物牡丹 Paeonia suffrutlcosa Andr 根皮及萝藦科植物徐长卿 Cynanchum paniculatum(Bge．)Kitag 干燥根 和根茎中的主要活性成分之一,其药理学活性广泛。据相关文献报道， 其在抗炎、抗变态、解热镇痛、降压、抗动脉粥样硬化及抗肿瘤方面 均有一定疗效。由于丹皮酚在抗肿瘤方面的逆转 MDR 作用，所以使得 抗癌药物能够在细胞内保持较高浓度。体内药物在肝脏的转运过程与 存在于细胞膜上的特殊转运蛋白有关，我们称这种转运蛋白为转运体 （transporters）。本研究就主要探讨丹皮酚对人肝癌细胞株 HepG2 药物 转运体表达、功能的影响及其可能的作用机制。 1、丹皮酚对人肝癌细胞株 HepG2 增殖效应的影响 本研究采用 CCK8 法检测了丹皮酚对 HepG2 细胞增殖效应的量效 和时效关系。结果发现：丹皮酚在浓度为 2~8 μg.mL-1 时并不显著抑制 细胞增殖，但在浓度为 16 μg.mL-1 时则显著降低细胞存活率；丹皮酚（8 μg.mL-1）处理 HepG2 细胞 6、12、24、48 h 后,细胞存活率基本超过 90%。 结合体内实验，本研究采用 2 μg.mL-1 丹皮酚处理 HepG2 细胞 24h。 2、丹皮酚对人肝癌细胞株 HepG2 转运体表达及功能的影响 3 通过 qRT-PCR、流式细胞术方法检测丹皮酚对 HepG2 细胞转运体 表达及功能变化的影响。研究发现，丹皮酚对 HepG2 细胞转运体 OATP1B1、OATP1B3、OATP2B1、BCRP 和 MRP2 在转录水平均有上 调作用，而对 OAT2、MRP4 在转录水平无显著性影响；丹皮酚上调 HepG2 细胞转运体 OATP1B1 及 BCRP 的转运效率。结果提示丹皮酚 （2μg.mL-1）可能通过诱导 HepG2 细胞 OATP1B1、OATP1B3、OATP2B1、 BCRP 和 MRP2 基因表达影响其对底物的转运效率，对 OAT2、MRP4 基因表达无明显影响。 3、丹皮酚诱导人肝癌细胞株 HepG2 部分转运体表达的可能作用 机制 通过 qRT-PCR 法检测发现，丹皮酚（2 μg.mL-1）作用 HepG2 细胞 24 h 后，核受体 PXR mRNA 表达上调，说明丹皮酚可能通过核受体 PXR 途径上调 He