磁性碳量子点探针的构建及其在肿瘤诊疗中的应用研究-药物分析学专业论文.docx

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 摘要 摘要 摘要 癌症的早期诊断已引起人们的高度重视，分子影像学检测作为癌症早期诊 断的重要工具，为肿瘤诊断提供更准确和完整的信息，以达到早期诊断、早期 治疗的目的。基于多功能纳米粒子的分子成像技术已在肿瘤检测的灵敏度和特 异性方面取得了一定进展，量子点、荧光染料分子和磁性纳米粒子等已经作为 成像探针运用到了活体荧光成像和磁共振成像中。然而，这些探针有毒而且水 溶液稳定性差，灵敏度欠佳，极大的限制了其在体内的应用。因此，构建一种 体系简单、生物友好、成像灵敏的多功能靶向探针是分子成像技术亟待解决的 问题。 基于此，本课题通过微波辅助法将氯化钆（ GdCl3）以钆离子 Gd3+的形式 掺杂到碳点 CDs 的里面，同时 PEI 对 CDs 表面进行氨基化修饰，我们得到了高 量子产率的掺钆碳量子点 Gd-CDs, 即能够在可见光照射下发出明亮的绿光，它 具有荧光强度高、光学稳定性和生物相容性好。以去铁蛋白纳米笼为载体，去 铁蛋白笼 AFn 独特的笼状结构特性即在 pH=2 蛋白笼支解成多个亚甲基结构使 得笼打开，在 pH=7 蛋白笼重新自组装从而实现封装药物阿霉素。Gd-CDs 作为 一个荧光兼磁性的探针偶联载药体系 AFn 包裹 DOX。在 EDC 和 NHS 催化剂 的 协 同 下 将 靶 头 叶 酸 FA 连 接 到 AFn 上 赋 予 其 肿 瘤 靶 向 能 力 。 Gd-CDs/AFn(DOX)/FA 在叶酸介导下特异性靶向肿瘤细胞以及肿瘤病变组织。 实现体内和体外的双模式（荧光/核磁共振）成像及细胞追踪，用于肿瘤的早期 诊断及治疗。 采用 X 射线光电子能谱技术（XPS）对制备的 Gd-CDs 进行元素分析，Gd 元素轨道的变化表明 Gd 离子被掺进去 CDs 中，通过透射电镜观察 Gd-CDs 的 粒径约 6 nm，多分散系数 PDI 为 0.201，Zeta 电位测其电位约 9.05 mV。Gd-CDs 的正电性表明其表面修饰上氨基。通过扫描 Gd-CDs 光谱图，制备的 Gd-CDs 具有明显的上、下转换发光性质。通过对制备的 Gd-CDs/AFn(DOX)/FA 进行物 理化学性质等表征，其平均粒径为 112 ± 3.5 nm, 电位约-23.7 ± 2.1 mV。采用紫 外可见分光光度计测定载药系统中 DOX 的包封率，结果表明其包封率达 86.6%。 采用透析法分别测定了制剂在 pH 5.0 和 pH 7.4 时 DOX 的体外释放，分析结果 显示通过调节 pH 值能较好的控制药物释放。在偏酸性环境 pH 5.0 时累计释药 I 率为 79.2%。Gd-CDs/AFn(DOX)/FA 因含有钆离子具有 T1 成像能力，MRI 体外 实验表明 Gd-CDs/AFn(DOX)/FA 在 T1 磁场下，具有明显的浓度依赖性，而且随 着浓度的增大呈现白化效应。 本研究选择人源的乳腺癌细胞（MCF-7）作为其体外抗肿瘤活性评价的模 型，考察了 Gd-CDs/AFn(DOX)/FA 细胞毒作用机制，包括细胞内摄取实验、抑 制率等。采用 MTT 法分别考察了 Gd-CDs、Gd-CDs/AFn 的细胞毒性，结果显 示，设定浓度为 0~200 μg/mL，Gd-CDs 和 Gd-CDs/AFn 两者均表现出低毒性， 细胞存活率均为 86%以上。且 Gd-CDs 键合到 AFn 表面后，相比 Gd-CDs 组 Gd-CDs/AFn 组的细胞存活率明显增强。MCF-7 细胞摄取实验中通过观察 Gd-CDs 自身的绿色荧光，Gd-CDs 能够较好的标记载药系统的细胞摄取情况， 与 Gd-CDs/AFn(DOX)相比，Gd-CDs/AFn(DOX)/FA 有较高的细胞摄取量，表明 连有叶