二羟维生素D3对血管加压素介导大鼠心脏成纤维细胞增殖及TGFβ1表达影响.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 1,25-二羟维生素 D3 对血管加压素介导的大鼠心脏成纤维细 胞增殖及 TGFβ-1 表达的影响 硕士研究生: 何蕊 导 师：邓平 教授 中文摘要 目的：通过观察1,25-二羟维生素D3（1,25-dihydroxy vitamin D3,1,25D）对 血管 加压素 （ Argipressine ， AVP ）诱导 的 大 鼠 心 脏 成 纤 维 细 胞 (cardiac fibmblasts，CFs)增殖的影响及其与转化生长因子β1（transforming growth factorβ1，TGFβ-1）的关系，探讨1,25-二羟维生素D3对心肌成纤维细胞增殖 的影响及其可能机制。 方法： 1．大鼠成纤维细胞培养和处理：复苏、传代培养； 2．细胞干预培养：将大鼠心脏成纤维细胞分为 12 孔进行培养，每孔含细胞数 5 3×103 个，共分成四组：AVP 组、VD 3 组、AVP+ VD3 组、空白对照组，其中 AVP 3组共 1 孔，予以 10－ 7mmol/L AVP 处理；VD 3 组共 A、B、C、D、E 5 孔，分别予 以 10-10，10-9，10-8，10-7，10-6mol/L 浓度的 VD 处理；AVP+VD 组共 A、B、C、D、 3 3 E 5 孔，均予以 10-7mmol/L AVP 处理，并分别予以 10-10，10-9，10-8，10-7，10-6mol/L 浓度的 VD3 处理；空白对照组共 1 孔，无干预。培养和干预 24 小时后，留取上 清液，收集细胞。 3．采用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐法(MTT 法)检测各组细胞的的吸光度值； 4．采用流式细胞分析仪技术（flow cytometry ,FCM）检测各组细胞的 DNA 合成 期（S 期）细胞百分比； 5 HYPERLINK /search?word=%E5%8F%8D%E8%BD%AC%E5%BD%95PCRamp;fr=qb_search_expamp;ie=utf8 \h ．采用反转录 PCR(reverse HYPERLINK /search?word=transcriptionamp;fr=qb_search_expamp;ie=utf8 \h transcription-PCR, HYPERLINK /search?word=RT-PCRamp;fr=qb_search_expamp;ie=utf8 \h RT-PCR)法检测各组细胞的中 TGF-β1 mRNA 表达水平，采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA）检测各组细胞培养上清液中 TGF-β1 的浓度。 结果： 2 1．AVP 组细胞的吸光度值(1.380±0.008）较空白对照组(1.100±0.015)明显增 高，差异有统计学意义（P0.05）; 2．AVP+ VD3 组各孔细胞的吸光度值分别为 A（1.345±0.005）、B（1.247±0.014）、 C(1.198±0.011)、D(1.159±0.010)、E（1.115±0.013），且呈浓度依赖性降低， 差异均有统计学意义(均 P0.05)，其中 E 孔吸光度值最低,差异均有统计学意义 (均 P0.05)；AVP+ VD3 组各孔吸光度值较对照组(1.100±0.015)均明显升高,差 异均有统计学意义(均 P0.05)，但较 AVP 组 (0.776±0.013）均明显降低，差 异均有统计学意义 (均 P0.05); 3．VD3 组各孔细胞的吸光度值分别为 A（0.956±0.005）、B（1.006±0.012）、C （1.052±0.004）、D（1.058±0.011）、E（1.037±0.013）, 均较对照组明显降 低，差异均有统计学意义(均 P0.05)； 4．AVP 组细胞的 S 期细胞百分比（35.2%）、AVP+VD3 组（E 孔）的 S 期细胞百分 比（29.69%）均较空白对照组（22.57%）明显增高，差异均有统计学意义（均 P0.05）； AVP+ VD3 组（E 孔）S 期细胞百分比较 AVP 组（29.69% VS 35.2%） 明显降低，差异有统计学意义（P0.05）；且 VD3 组（E 孔）S 期细胞百分比明显 低于空白对照组（19.25% VS 22.57%），差异有统计学意义（P0.05）; 5．AVP 组细胞 TGF-β1 mRNA 表达水平较空白对照组（2.893±0.205 VS 1.000 ±0.014）明显增高，差异有统计学意义（P0.05）；VD3+AVP 组（E 孔）细胞 TGF- β1 mRNA 水平较 AVP 组（1.895±0.122 VS