带科绦虫8ku诊断抗原蛋白基因家族的研究-预防兽医学专业论文.docx

I I 带科绦虫 8 ku 诊断抗原蛋白基因家族的研究 摘 要 目的：克隆和分析带科绦虫中牛带绦虫和细粒棘球绦虫的 8 ku 诊断抗原蛋白家族基因。① 从 分子水平上找出牛带绦虫 8 ku 诊断抗原蛋白家族基因各成员基因的变异规律，以此期望筛选出具有 潜在应用价值的抗原基因，阐明引起带科绦虫病（绦虫蚴病）血清学交叉反应的分子基础，也为带 科绦虫 8 ku 蛋白家族的分子进化分析提供资料。② 对棘球蚴的重要诊断基因 AgB1 和 AgB2 进行 克隆和表达，为下一步 AgB1 和 AgB2 抗原的血清学检测及效果评价奠定一定的基础。方法：① 以 牛带绦虫六钩蚴为对象从 DNA 水平和 cDNA 水平对 8 ku 蛋白家族基因进行克隆与序列测定，用分 子生物学软件对各序列进行同源性分析和带科绦虫 8 ku 蛋白家族基因分子系统进化树分析。② 以 青海源细粒棘球蚴为对象，采用 RT-PCR 方法对 AgB1 和 AgB2 基因进行克隆，构建原核表达系统 对其进行表达。结果：① 筛选了 224 个 8 ku 蛋白家族基因阳性克隆重组子，测序，通过序列比对 发现共存在 3 型 23 个不同基因序列，其中 A 型 2 个，阅读框大小为 216 bp，编码 72 个氨基酸；B 型 2 个，阅读框大小为 249 bp，编码 83 个氨基酸；C 型 19 个，阅读框大小为 258 bp，编码 86 个氨 基酸。氨基酸序列同源性比对发现 TSA8KD-14 基因与其它成员基因序列差异很大，比较特殊。② 带 科绦虫 8 ku 蛋白家族基因分子系统进化树分析可以发现牛带绦虫 TSA8KD-1 基因、TSA8KD-2 基因、 TSA8KD-3 基因、TSA8KD-4 基因、TSA8KD-5 基因、TSA8KD-11 基因、TSA8KD-12 基因和 TSA8KD-17 基因和猪囊虫重要诊断抗原基因 TsRS1、TsRS2 和 Ts14 亲缘关系很近。③ 克隆的 AgB1、 AgB2 基因开放阅读框大小分别为 198 bp 和 213 bp，以 GST 融合形式表达的蛋白约为 34 ku。结论： ①首次克隆到牛带绦虫 8 ku 蛋白家族基因；② 牛带绦虫 TSA8KD-1 基因、TSA8KD-2 基因、 TSA8KD-3 基因、TSA8KD-4 基因、TSA8KD-5 基因、TSA8KD-11 基因、TSA8KD-12 基因和 TSA8KD-17 基因可能是牛带绦虫病的重要免疫诊断抗原基因；③ 与 Genebank 登录的 AgB1 和 AgB2 基因相比对，AgB1 的相似性为 97 %，AgB2 相似性为 100 %；④ AgB1 和 AgB2 最佳诱导表达条件 为：2×YT 培养基、诱导温度 37℃、IPTG 诱导剂量 0.1 mmol/L、诱导时间为 6 h。 关键词：带科绦虫,8 ku 蛋白家族基因,AgB1 基因,AgB2 基因,诊断抗原 II II Study on 8-kDa diagnostic Antigen Family Genes from Taeniidae Abstract Objectives: Clon and analysis the 8 ku protein family gene from Taenia saginata and Echinococcus granulosus. ① Potential valuable antigenic genes are expected to be found gene variation of Taenia saginata 8 ku protein family genes through molecular analysis, which provides information for molecular evolution analysis on TSA8 ku proteins of Taeniidae. ② The valuable diagnostic genes AgB1 and AgB2 form Cystic echinococcus are cloned and expressed in Escherichia coli, which establishes an unvarying foundation for serological detect of animals with CE infection. Methods: ① 8 ku family genes were cloned from Taenia saginata oncospheres and analyzed at genomic DNA and tran