番茄SlDP1基因的克隆及功能研究-生物学专业论文.docxVIP

重庆大学硕士学位 重庆大学硕士学位论文 英文摘要 PAGE PAGE VI explants, detected by NPTII and got 5 lines of transgeneic tomato totally 15 plants. Real-time PCR detection revealed that gene silencing efficiengy was high as 90% in tomato leaves. Keywords: SlDP1gene, gene silence, bioinformatics, expression analysis 重庆大学硕士学位论 重庆大学硕士学位论文 目 录 目 录 中文摘要I 英文摘要 II 1 绪 论 1 1.1 番茄概论 1 1.2 细胞周期简介 1 TOC \o 1-2 \h \z \u HYPERLINK \l _TOC_250004 1.3 E2F/ DP 家族转录因子的生物学特性 2 HYPERLINK \l _TOC_250003 E2F 基因 2 HYPERLINK \l _TOC_250002 DP 基因 3 HYPERLINK \l _TOC_250001 1.3.3 E2F 和 DP 基因参与细胞周期调控 3 HYPERLINK \l _TOC_250000 1.3.4 植物 E2F/DP 家族基因生物学功能简介 4 1.4 研究的目的与意义 5 1.5 研究内容与技术路线 6 1.5.1 研究内容 6 1.5.2 技术路线 6 1.6 本文的创新之处 7 2 番茄 SlDP1 基因的生物信息学分析 8 2.1 软件及方法 8 2.2 结果与分析 8 2.2.1 SlDP1 核苷酸及编码蛋白质的理化分析 8 2.2.2 SlDP1 蛋白二级结构预测及同源程度分析 8 3 番茄 SlDP1 基因的表达模式 10 3.1 试验材料 10 3.1.1 主要实验试剂 10 3.1.2 植物材料 10 3.1.3 主要仪器 10 3.2 试验方法 10 3.2.1 番茄各组织总 RNA 的提取及检测 10 3.2.2 反转录 cDNA 的方法 11 3.2.3 定量 PCR 研究 SlDP1 基因的表达模式 12 3.3 结果与分析 13 3.3.1 SlDP1 基因在野生型番茄组织的表达模式定量 PCR 13 3.3.2 SlDP1 基因在野生型 WT、突变体 rin 及 Nr 组织的表达量比较 14 4 番茄 SlDP1 基因表达特性分析 15 4.1 材料与仪器 15 4.1.1 植物材料 15 4.1.2 试剂与激素 15 4.1.3 主要仪器 16 4.2 实验方法 16 4.2.1 样品的激素处理方法 16 4.2.2 番茄幼苗的胁迫处理方法 16 4.2.3 定量 PCR 研究激素及胁迫处理番茄 SlDP1 基因的表达 17 4.3 实验结果 17 4.3.1 激素处理对番茄 SlDP1 基因的影响定量 PCR 17 4.3.2 盐胁迫和伤害胁迫对番茄 SlDP1 基因的影响 18 5 pBIN19-SlDP1 沉默载体的构建及转化番茄的研究 19 5.1 实验材料与主要仪器 19 5.1.1 菌株及载体 19 5.1.2 植物材料及引物 19 5.1.3 试剂、酶、抗生素及激素 19 5.1.4 主要仪器设备 19 5.1.5 培养基及试剂的配制 20 5.2 实验方法 22 5.2.1 制备大肠杆菌感受态细胞 22 5.2.2 SlDP1 基因全长的克隆及鉴定 22 5.2.3 SlDP1 基因片段的克隆及沉默载体的构建 24 5.2.4 番茄的转化及转基因鉴定 29 5.3 结果与分析 32 5.3.1 SlDP1 基因开放阅读框及部分 3-末端序列的克隆及鉴定 32 5.3.2 番茄沉默表达载体的构建及鉴定 34 5.3.3 番茄的遗传转化 37 5.3.4 转基因番茄 NPTII 基因检测 38 5.3.5 转基因番茄沉默效果鉴定 39 6 讨 论 40 7 结论与展望 42 7.1 主要结论 42 7.2 后续工作及展望 42 致 谢 44 参考文献 45 附 录 49 A. 作者在攻读学位期间发表的论文目录 49 重庆大学硕士学位 重庆大学硕士学位论文 1 绪 论 PAGE PAGE 10 1 绪 论 1.1 番茄概论 蔬菜和水果是人类饮食中维生素、矿物质和纤维素的重要来源，含有的抗氧 化物可以预防多种慢性病。番茄（Lycopersicum