雌激素浓度对于髁突软骨细胞中雌激素受体mRNA表达的影响-口腔临床医学专业论文.docxVIP

安 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 6 英文词表索引 缩略语 英文全称 中文全称 ICR Idiopathic condylar resorption 髁突特发性吸收 ER Estrogen recerptor, 雌激素受体 E2 Estradiol 雌二醇 MCC Mandibular condylar artilage cell 髁突软骨细胞 GAGs Glycosamino glycans 糖胺多糖 RT-PCR Real-time polymerase chain reaction 实时聚合酶链反应 GAPDA Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase HYPERLINK /view/3851327.htm 甘油醛-3-磷酸脱氢 酶 DEPC Diethypyrocarbonate HYPERLINK /view/573161.htm 焦碳酸二乙酯 雌激素浓度对于髁突软骨细胞中雌激素受体mRNA 表达的影响 中文摘要 目的：颞下颌关节髁突特发性吸收（ICR）是一种多发于青春期女性的髁突渐进性、 不明原因的吸收伴前牙开颌、下颌后缩所致的严重的面部畸形。现有的研究发现 ICR 的患者均出现雌激素水平降低，但同样是雌激素水平低下的骨质疏松症却是全 身性骨骼疾病，而 ICR 只发生在髁突。也就是说，迄今学术界尚无法解释 ICR 的 患者不出现像骨质疏松症一样的全身性骨骼疾病，而只在髁突发生特异性吸收这 一现象。研究已证实人的颞下颌关节中存在雌激素受体，即髁突软骨是雌激素的 靶器官之一。我们推论：只发生在髁突吸收的这种特异性现象可能与髁突软骨中 存在雌激素受体有某种潜在的关联。基于此，本研究拟以雌激素受体为切入点， 试图通过半定量研究雌激素浓度对于髁突软骨细胞中雌激素受体 mRNA 表达的影 响，揭示雌激素及其受体对髁突特发性吸收发病的影响，从而对颞颌关节髁突特 发性吸收的发病机制做出科学的解释。 方法 实验材料取自3周龄的SD大鼠，脱颈处死后，在无菌条件下收集髁突软骨， 用胰酶和II型胶原酶联合消化后分离培养髁突软骨细胞。将获得的的髁突软骨细 胞分成两部分，一部分进行细胞鉴定及培养传代，另一部进行雌激素干预实验。 细胞鉴定与传代：用甲苯胺蓝染色法，结合形态学鉴定髁突软骨细胞，并进行原 代细胞传代，观察细胞形态和增殖速度的变化。 雌激素干预实验：细胞分为空白对照组、17-β雌二醇组(10-3，10一6,10-9,lO-12mmol ／L)。其中对照组仅加入同浓度的雌激素溶剂乙醇。用倒置显微镜观察细胞的形 态变化，在细胞接近长满时给药，加药24小时后收集各组细胞进行RT-PCR, 计算 出每组细胞中GAPDH 及 ERα mRNA和ERβ mRNA的CT值，进行统计分析，所有数据 以均数士标准差表示，采用单因素方差分析，组间比较采用LSD法， 量效关系用 Speaman等级相关检验，以a=0．05为检验水准。 结果:刚接种的髁突软骨细胞呈球形，约12h后可见细胞贴壁，培养箱静置24h后可 见大部分细胞贴壁，起初为圆形，后逐渐增大成多角形，有较多突起，胞核淡染。 3-4天后，可见细胞呈集落状生长，一周左右细胞逐渐融合成单层，呈“铺路石“样 生长。收集的原代细胞经甲苯胺蓝染色后见胞浆蓝染，细胞外可见异染颗粒。雌 激素干预实验发现无论是实验组还是空白对照组中，ERα和ERβ在体外培养的髁 突软骨细胞中均有表达，外源性的17β雌二醇能够上调ERα的基因表达同时下调 ERβmRNA表达。其中10-9mmol／L作用下，ERαmRNA上调最为明显。 结论:1. 体外培养的大鼠髁突软骨细胞传代至第三代后开始去分化。 2. 大鼠髁突软骨细胞存在 ERα 和 ERβ。 3. E2 可以上调 ERα的表达而下调 ER β的表达，在生理范围的雌激素浓度下， E2 上调 ERα基因表达的作用最为明显。 关键词：雌激素；雌激素受体；细胞培养；mRNA; RT-PCR Effect of estradiol on the expressions of estrogen receptor in 安徽 安徽医科大学硕士学位论文 MCC Purpose: ICR( idiopathic condylar resorption) is a kind of serious facial deformity mostly happen among adolescence females which caused by condylar process progressive, absorption of unknown origin and anterior open occlusal, mandibula