沉默GRP94表达对肺癌A549细胞增殖能力的影响-外科学(胸心外科)专业论文.docx

符号说明 英文缩写 GRP 英文全称 Glucose-regulated proteins 中文全称 葡萄糖调节蛋白 GRP94 Glucose-regulated protein of 94KDa 葡萄糖调节蛋白 94 UPR Unfolded protein response 非折叠蛋白反应 mRNA Messenger ribonucleicacid 信使核糖核酸 SiRNA Small-interfering ribnucleicacid 小干扰核糖核酸 RNAi ribnucleicacid interference 核糖核酸干涉 CyclinD1 D1 type cyclin 细胞周期蛋白 D1 β-actenin β-actenin β环连蛋白 Min Minute 分 H Hour 小时 d Day 天 UL Microliter 微升 Ug Microgram 微克 WB Western Blot 蛋白印记技术 CCK-8 Cell Counting Kit-8 四唑盐 PBS Phosphate buffer saline 磷酸缓冲液 ECL Enhanced chemiluminescence 增强化学发光液体 TEMED Tetramethylethylenediamin 四甲基乙二胺 SDS Sodium dodecyl sulphate 十二烷基硫酸钠 TBS Tris-buffered saline Tris 缓冲溶液 1 沉默 GRP94 表达对肺癌 A549 细胞增殖能力的影响 摘 要 目的：探讨沉默 GRP94 基因对肺癌 A549 细胞增殖能力的影响及 可能机制。方法：分别采用 qRT-PCR 法、Western blot 检测不同肺癌细 胞系和肺支气管上皮细胞中 GRP94 的表达；设计、合成靶向 GRP94 基因 siRNA，通过脂质体转染至人肺腺癌 A549 细胞中，采用 qRT-PCR、 Western blot 分别检测转染 siRNA-GRP94 后细胞内 GRP94、c-myc 及细 胞周期蛋白 cyclinD1 mRNA 及蛋白水平表达的影响；采用 CCK-8 实验， 平板集落实验检测沉默 GRP94 对细胞的增殖能力的影响。结果： qRT-PCR 和 Western blot 结果显示 GRP94 在肺癌细胞中的表达较肺支 气 管 上 皮 细 胞 显 著 高 表 达 （P0.05 ， P0.01 ）， siRNA-GRP94 组 中 GRP94、c-myc 及 cyclinD1 表达明显下调（P0.05）；A549 细胞增殖能 力受到明显抑制（P0.01, P0.05）。结论：GRP94 在肺癌细胞中高表 达，沉默 GRP94 可明显抑制肺癌 A549 细胞的增殖能力，其可能通过 调控 c-myc、cyclinD1 表达参与其中。 关键词：GRP94， siRNA，肺癌，增殖 2 EFFECT OF GRP94 EXPRESSION DOWN-REGULATION ON PROLIFERATION ABILITIES OF HUMAN LUNG CARCINOMA A549 CELLS ABSTRACT Objective:To investigate the effect of GRP94 gene expression down-regulation on the proliferation in human lung carcinoma A549 cells and possible mechanism. Methods: Expression of GRP94 was examined in 4 lung carcinoma cells and two Lung bronchial epithelial cells by qRT-PCR and western blot. Chemically synthesized siRNA targeting GRP94 gene and transfected into A549 cells used by Liopfectamine2000. The mRNA and protein expression levels of GRP94, c-myc and cyclinD1 were detected by qRT-PCR and Western blotting. CCK8 assay and Colony formation assay were used to detect the effect of specific GRP94 siRNA on cell proliferation. Results:The