粗壮脉纹孢菌发酵农副产品生产类胡萝卜素的研究-发酵工程专业论文.docx

学位论 学位论文独创性声明 万方数据 万方数据 一、学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机 构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡 献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名（手写）： 签字日期： 年 月 日 二、学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文 被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关 数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论 文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志 社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位 论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按 “章程”规定享受相关权益。 学位论文作者签名（手写）： 导师签名（手写）： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 论文题目 姓 名 学号 论文级别 博士□ 硕士□ 院 / 系 / 所 专业 联系电话 E_mail 通信地址(邮编)： 备注： □公开 □保密（向校学位办申请获批准为“保密”， 年 月后公开） I 摘要 摘要 摘要 本课题利用实验室早期从江西传统发酵食品中筛选分离并诱变得到的高产 纤维素酶和类胡萝卜素的优良菌株——粗壮脉纹孢菌（Neurospora crassa）对目 前附加值比较低的两种农副产品—米糠和啤酒渣进行固态发酵，通过优化发酵 的工艺条件，提高其产类胡萝卜素的含量，研究了粗壮脉纹孢菌发酵产生的类 胡萝卜素在孢内的积累和形式，通过高效液相色谱法对发酵所得类胡萝卜素进 行分离鉴定，探讨了类胡萝卜素的稳定性，抗氧化能力以及对肠道的影响，以 对类胡萝卜素的进一步开发利用提供一定的理论基础和科学依据。主要结果如 下： 1. 粗壮脉纹孢菌中的类胡萝卜素主要以色素颗粒的形式存在，而且主要存 在于菌丝体细胞壁以及孢子中孢子壁附近，另外孢子所含色素颗粒数量远大于 菌丝体的。 2. 通过 Plackett-Burman 实验设计和响应面法优化得到 Neurospora crassa 固态发酵农副产品产类胡萝卜素的最佳工艺条件为：米糠、甘薯渣和啤酒糟分 别以 34.25%，45.75% 和 20%的比例添加，硫酸铵为 0.51%，初始含水量为 72.15%，接种量 1%，发酵时间 120h，pH6.5。在此最优培养基组成条件下，类 胡萝卜素的产量高达 966.21 μg/g 培养物。 3. 经过高效液相色谱条件的优化，分离粗壮脉纹孢菌所产类胡萝卜素的最 优条件为：甲醇：乙腈：异丙醇（54:44:2），等度洗脱，柱温 30℃；流速 0.8ml/min； 检测波长：460nm；进样方式：自动进样；进样量：20μL。用此方法从类胡萝 卜素粗提物中分离出 15 种组分，阿朴-4’-番茄红素酸，β-阿朴-4‘-胡萝卜醛， 链孢霉黄素，γ-胡萝卜素，3,4-二脱氢番茄红素，全反式番茄红素，15 or 15-顺 式’-番茄红素，链孢红素，红酵母烯，顺式红酵母烯，ζ-胡萝卜素，全反式β 胡萝卜素，13 或 13’顺式?-胡萝卜素，两种顺式红酵母烯。由外标法得到全反式 β-胡萝卜素含量为 18.56%，番茄红素含量为 2.51%。 4. 类胡萝卜素的稳定性试验发现：孢子中类胡萝卜素在孢子壁的保护下对 高温，酸性条件以及氧化剂比较稳定。经丙酮提取后所得的类胡萝卜素对日光、 室内光照不稳定，避光条件下较为稳定；在 80℃以上的温度不稳定；在碱性条 II 件下较稳定，而酸性环境中易降解和异构化；金属离子 Fe3+和 Al3+会显著降解类 胡萝卜素；氧化剂过氧化氢对其有破坏作用，加入还原剂 VC 有一定的保护作用， 但 VC 在高浓度时反而会加剧其异构化或降解，还原剂 BHT 比 VC 具有更优的 保护效果。 5. 粗壮脉纹胞菌所产类胡萝卜素的抗氧化实验结果显示：与常见的抗氧化 剂相比，粗壮脉纹孢菌所产类胡萝卜素对 DPPH 自由基，超氧自由基，羟基自 由基这三种不同的自由基均有较强的清除能力，同时比同浓度的番茄红素，β- 胡萝卜素清除自由基能力强，此外粗壮脉纹孢菌所产类胡萝卜素还具有较高的 总抗氧化能力和较强的金属螯合能力。 6. Neurospora crassa 所产类胡萝卜素粗提物的体外发酵实验发现：100mg/L 类胡萝卜素具有最良好的发酵特性，累积产气量为 6.91mL，发酵最终 p