紫丁香ISSRPCR反应体系优化研究.docVIP

（2011 （2011 届） Liaoning Normal University 本科生毕业论文（设计） 题 B： 紫丁香ISSR-PCR反应体系优化研究 学 院： 生命科学学院 专 业： 生物技术 班级序号： 3班5号 学 号： 学生姓名： 指导教师： 2015年5月 目 IJ g 1.材料与方法 1.1材料 1.1.1试验材料 1.1.2主要试剂与仪器 1.2方法 1.2.1紫丁香基因组DNA的提取及检测.... ISSR-PCR 反应体系 ISSR-PCR反应体系退火温度的确定 ISSR-PCR 反应程序 ISSR-PCR产物的电泳检测 2?關 DNA模板浓度对ISSR扩增效果的影响...... TaqDNA聚合酶量对ISSR扩增效果的影响 Mg2+浓度对ISSR扩增效果的影响 2.4退火温度对ISSR扩增效果的影响 2.5dNTPs浓度对ISSR扩增效果的影响 2.6引物浓度对ISSR扩增效果的影响 3.分析与讨论 W ,??3-5-5- ,??3- 5- 5- 5- 5- 5- ..-5- ..-6- ..-7- ..-7- ..-7- ,??8- ..-8- ..-9- ..-9- -10- 11 ? -12- -13- -15- -16 - 紫丁香ISSR-PCR反应体系优化研究 中文 以紫丁香为试验材料，采用改g CTAB法提取基因组DNA，为了获得最佳的紫丁 香ISSR-PCR反应体系，本试验利用梯度试验对ISSR-PCR扩增结果有影响的dNTPs 的浓度、TaqDNA聚合酶量、Mg2+浓度、退火温度、模板浓度、引物浓度共6个因 子进行摸索和优化。确定丫 25pL时优化的反应体系:10PCR buffer （不含Mg2+） 2.5（aL、模板 DNA10ng/pL、dNTPs0.2 mmol/L、Taq DNA 锻合酶 1.0U、引物 0.6mmol/L（卿选ft UBC set.9）、Mg2 2.0mmol/L、退火温度 49°C。 关键词:紫丁香;ISSR-PCR;体系优化 Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Natural Syringa oblate Abstract: Using Syringa oblata as material，genomic DNA of Syringa oblata was extracted by modified CTAB method,for optimizing ISSR-PCR reaction system of Syringa oblate.gradient test was used to explore and optimize of ISSR-PCR. system which included dNTPs concentration、TaqDNA polymerase amount、Mg2’ concentration、 annealing temperature、DNA concentration、primer concentration.The twenty-five (xL optimized reaction system contained lOxPCR buffer(without Mg2 )2.5|jLn DNA 1.0 pL、 dNTP 0.2 mmol/L、TaqDNA polymerase 1.0U、primer0.6mmol/L(sift from UBC set.9)、 Mg2 2.0mmol/L annealing temperature490C。 Key words：Syringa oblate ;ISSR-PCR;optimization of ISSR-PCR reaction 紫丁香(Syringa oblata)在棺物分类学上駡于被子梢物f j (Angiospermae)、 双子叶植物纲(Dicotyledoneae)、捩花目(Contortae)、木犀科(Oleaceae)、 丁香屌(Syringa)，俗称丁香、肀北紫丁香、百节、紫丁白、情客、龙梢子，原产 我W平北地区。紫丁香在中W已有1000多年的栽培历史，其花小芬芳，紫色、紫红 色或蓝色，春季盛开时，硕大而艳丽的花序布满全株，观赏效果甚佳，足我W著名的观 赏花木之一。同时，紫丁香还具有较高的药用价值，其鲜叶制成的溶液，对弗氏痢疾 杆菌进行体外抑菌试验，效果较强，用于防治菌痢，既经济，乂便于推广。因此，应当加 强对其种质资源、遗传多样性的保护，实现可持续地幵发利用。目前我W紫丁香 的研究主要集屮于栽培、生理等方面，而分子生物学方面的研究少有报道，进行更 为深入的基于分子