527磷酸二酯酶产生菌的筛选.doc

- --- 第 1 章绪论 结构分析表明，核酸酶 P1 有两个口袋状的结构（图 1.4），有可能是两个对单核苷 酸的吸附或识别位点。其中，Phe 位点靠近三锌活性中心，主要依靠 Phe61 和腺苷酸之 间相互作用。如图所示，Asp63 的羧基可能与腺苷酸的 N1 和 62NH2 形成氢键。第二个 识别位点为Tyr 位点，在这个位点中，腺苷酸夹在 Tyr144 和 Tyr155 之间，位点底部的 Asp146 和腺苷酸可形成氢键。三锌活性中心位于其中一种口袋结构附近，由于该结构 只允许单链 DNA 或 RNA 进入，因此 5-磷酸二酯酶只能催化单链核酸水解。研究还表 明，每个识别结构底部的 Asp 与腺苷酸形成的氢键的牢固程度可能与 pH 值有关。因此， 根据分子结构推测 5-磷酸二酯酶的催化机理可能为：在 Zn1 和 Zn3 之间水分子的- OH 经过Asp45 激活之后，攻击单链核酸中的 P-O3′键，从而与 O3R′发生亲核取代，Zn2 对 劈分下来的 O3′起到稳定作用，多余的负电荷则被Arg48 中和[9]。 图 1.4 核酸酶 P1 的底物的结合位点 Figure 1.4 Binding sides of substrate about Nuclease P1 Fujimoto 等人测定了溶液中核酸酶 P1 的旋光色散 ORD 和圆二色光谱CD，结果表 明，核酸