PCR原理百度百科PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制.PDFVIP

PCR 原理 （百度百科） PCR 技术的基本原理类似于 DNA 的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡 核苷酸引物。PCR 由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板 DNA 的变性：模板 DNA 经加热至 93℃左右一定时间后，使模板 DNA 双链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解 离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板 DNA 与引物的退火 （复 性）：模板 DNA 经加热变性成单链后，温度降至 55℃左右，引物与模板 DNA 单链的互补 序列配对结合；③引物的延伸：DNA 模板--引物结合物在 TaqDNA 聚合酶的作用下，以dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板 DNA 链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链” ， 而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2～4 分钟，2～3 小时就能将待 扩目的基因扩增放大几百万倍。 预变性 模板 DNA 完全变性与 PCR 酶的完全激活对 PCR 能否成功至关重要，建议加热时间参 考试剂说明书，一般未修饰的 Taq 酶激活时间为两分钟。 变性步骤 循环中一般95℃，30秒足以使各种靶 DNA 序列完全变性，可能