改进双抗夹心ABC=D用于筛选单抗杂交瘤细胞株.PDFVIP

! ##$ 年% 月 重庆师范大学学报（自然科学版） ’() ##$ 第* 卷 第+ 期 ,’-./( ,0 12,.345.3 6,-7/( 8.59:-;5)（6/’-/( =5:.: ） ?,(@ * 6,@ + 改进双抗夹心ABC=D 用于筛选单抗杂交瘤细胞株! 胡仁建，范! 开，蔡家利 （重庆工学院化工与生物工程学院，重庆E###*# ） 摘! 要：本文利用改进双抗夹心ABC=D 筛选一种可测定血清样品中与血浆蛋白结合的蛋白质药物的单抗。用兔抗 FG# 多抗经亲和层析纯化并包被后，加入用G#H 猴血浆IJ= 还原后的抗原FG# ，再加入杂交瘤细胞株上清液和 KLIM羊抗鼠C3N、底物反应液筛选阳性单抗杂交瘤细胞株。结果用改进后的双抗夹心ABC=D 筛成功地选出O 株能稳 定分泌针对FG# 的单抗杂交瘤细胞株，分别命名为G1P 、Q% 、+A 、*RE 、*RO 、OJP ；细胞株产生的单抗用ABC=D 法能 检测出血清样品中的FG# 的浓度。提示改进的双抗夹心ABC=D 可用于针对与血浆蛋白结合的蛋白质药物的单抗 杂交瘤细胞株的筛选。 关键词：单抗；双抗夹心ABC=D ；杂交瘤细胞株；筛选；血浆 中图分类号：L+P @ GG 文献标识码：D! ! ! 文章编号：GO%M OOP+（##$ ）#+M ##%%M #E ! ! 重组新型人角质细胞生长因子变构体（代号 G@ 方法 FG# ）由天然角质细胞生长因子（FNR ）经基因改造 ［GM ］ G ）按常规免疫方案 免疫家兔制备抗 FG# 而成，由大肠杆菌重组表达而制备，能抑制成纤维细 ［ ］ 多抗，用V-,:5. D 亲和层析 纯化多抗。 胞增殖和分化，而天然角质细胞生长因子（FNR ）不 ）杂交瘤细胞系的建立。JDBJU 小鼠的免 具备此作用。FG# 进入血液后，用间接ABC=D 法筛 疫：将纯化的FG# 稀释成# @ * 73U 7B ，取# @ O 7B 选的抗FG# 单抗无法检测到FG# 的“存在”，后来 与等量福氏完全佐剂充分乳化后腹腔、皮下和肌肉 经实验证实FG# 与血浆蛋白发生了结合，而且，血 多点免疫$ 周龄的雌性JDBJU 小鼠，# @ E 7BU 只； 浆蛋白封住了FG# 与其对应的单抗结合的位点。 以后每隔 周相同剂量抗原与福氏不完全佐剂充分 抗FG# 单抗建立的ABC=D 无法检测到血清样品中 乳化后，皮下和肌肉多点免疫 次。融合前+ 天，用 的FG# 的浓度。有必要建立一种新的筛选阳性单 加倍量的不加佐剂的抗原，皮下和肌肉多点免疫 G 抗杂交瘤细胞株的方法，使获得的单抗能测定血清 次。 样品中与血浆蛋白结合的药物浓度。 单克隆抗体检测方法的建立：建立改进的双抗 夹心ABC=D ，通过方阵滴定确定最佳的兔抗FG# 多 G 材料与方法 抗包被浓度和最佳抗原 FG# 的作用浓度以及阴 G@ G 材料 性、阳性血清（= W 、= X ）最佳工作浓度。 FG# 、猴血浆和兔抗 FG# 多抗由重庆富进生 细胞融合和杂交瘤细胞克隆化：参照R-/.Y Z 物医药有限公司提供，弗氏完全佐剂和弗氏不完全 R52［G，+ME ］进行细胞融合和杂交瘤细胞克隆化，阳性 佐剂购自=537/ 公司，酶标板购自,;/- 公司，J=D 、 杂交瘤细胞的克隆采用有限稀释法。将细胞用含 KLIM羊抗鼠C3N 购自北京鼎国生物技术有限公司， K[ 完全培养基稀释成# @ * 个U 7B G 个密度，分