富血小板血浆对光老化人皮肤成纤维细胞体外增殖的影响-外科学(整形外科)专业论文.docx

独创性声明 本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其 他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切 法律后果。 学位论文作者签名： 日期：2015 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本论文属于 保密□ ，在 年解密后适用本授权书。 不保密□。 （请在以上方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期：2015 年 5 月 日 日期：2015 年 5 月 日 目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 中英文缩略词表1 HYPERLINK \l _bookmark1 中文摘要2 HYPERLINK \l _bookmark2 ABSTRACT 3 HYPERLINK \l _bookmark3 前 言5 HYPERLINK \l _bookmark4 材料和方法6 HYPERLINK \l _bookmark5 结 果12 HYPERLINK \l _bookmark6 讨 论17 HYPERLINK \l _bookmark7 参考文献21 HYPERLINK \l _bookmark35 综 述24 HYPERLINK \l _bookmark54 致 谢37 华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE PAGE 1 中英文缩略词表 英文缩写 英文名称 中文名称 HDFs Human dermal fibroblasts 人皮肤成纤维细胞 PRP Platelet-rich plasma 富血小板血浆 SA-β-gal senescence-associated β-galactosidase 老化相关 β－半乳糖苷 酶 UVA ultraviolet A 长波紫外线 PI Propidium Iodide 碘化丙啶 DAPI 4,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride 4,6-二脒基-2-苯基吲哚 二盐酸盐 UVC ultraviolet C 短波紫外线 UVB ultraviolet B 中波紫外线 VEGF Vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 PDGF Platelet-derived growth factor 血小板衍生生长因子 TGF-β IGF-1 EGF Transforming growth factor-β Insulin like growth factor-1 Epidermal growth factor 转化生长因子-β 胰岛素样生长因子-1 表皮生长因子 IL-1 PBS Interleukin-1 Phosphate buffer salts 白细胞介素-1 磷酸盐缓冲液 EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid 乙二胺四乙酸 DMEM Dulbeccos Modified Eagle Media 基本培养基 MMP-1 FBS Matrix metalloproteinases-1 fetal bovine serum 基质金属蛋白酶－1 胎牛血清 CatK SOD Cathepsin K Superoxide Dismutase 组织蛋白酶 K 超氧化物歧化酶 中文摘要 目的：探索人皮肤成纤维细胞（HDFs）体外分离及培养的方法，利用长波紫外 线（UVA） 照射诱导，体外建立 HDFs 光老化模型，进而观察不同浓度的富血 小板血浆（PRP）对光老化 HDF 增值的影响，探索较适宜的 PRP 作用浓度，为 PRP 在皮肤年轻化方向的临床应用，提供一定的理论基础。方法：1、利用组织 块法分离、培养 HDFs，不同能量值的 UVA 照射处于对数生长期的第三代 HDFs， 根据老化细胞比率选定较适宜照射能量值，对细胞进行光老化诱导。老化相关 β －半乳糖苷酶(Senescence β-Galactosidase ,SA-β-gal)染色试剂盒[17-20]和流式细 胞术[22]分别对照射组和未照射组细胞进行老化染色及细胞周期的检测来确定 光老化细胞模型的成功建立。2、采取二次离心法提取人血 PRP，利