干扰素-γ对黑色素瘤细胞血管生成拟态的影响-基础医学专业论文.docx

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 本论文属于 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 不保密 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 研究干扰素-γ（IFN-γ）在体外对人黑色素瘤细胞系MUM-2B迁移、侵袭和 血管生成拟态（VM）形成能力的影响，探讨其可能的分子机制。 方法 以人黑色素瘤细胞系MUM-2B作为研究对象，分3组进行体外培养：对照组 在含有10% FBS的DMEM培养基中培养；实验组分别在含有10% FBS的DMEM 培养基中加入10 μg/L IFN-γ和100 μg/L IFN-γ； 第一部分：观察IFN-γ在体外对黑色素瘤细胞VM形成能力的影响 1. 利用划痕实验观察不同浓度的IFN-γ对MUM-2B细胞迁移能力的影响； 2. 利用Transwell侵袭实验观察不同浓度的IFN-γ对MUM-2B细胞侵袭能力的影 响； 3. 利用三维培养实验观察不同浓度的IFN-γ对MUM-2B细胞体外形成VM管道 能力的影响。 第二部分：探讨IFN-γ对黑色素瘤细胞VM影响的分子机制 4. 利用Western blot检测不同浓度的IFN-γ对MUM-2B细胞STAT1磷酸化的影 响； 5. 利用RT-PCR检测不同浓度的IFN-γ对MUM-2B细胞EMT相关标记物 VE-cadherin、Vimentin和E-cadherin在mRNA水平表达的影响； 利用Western blot检测不同浓度的IFN-γ对MUM-2B细胞EMT相关标记物 VE-cadherin、Vimentin和E-cadherin在蛋白水平表达的影响； 利用Western blot检测不同浓度的IFN-γ对MUM-2B细胞EMT相关调节因子 Twist1和Slug在蛋白水平表达的影响； 利用Western blot检测不同浓度的IFN-γ对MUM-2B细胞VEGF在蛋白水平表 达的影响； 9. 利用明胶酶谱实验检测不同浓度的IFN-γ对MUM-2B细胞基质金属蛋白 I 酶家族成员MMP-2和MMP-9活性的影响。 结果 1. 划痕实验结果显示，IFN-γ处理组的细胞迁移距离均低于对照组，100 μg/L IFN-γ处理组的细胞迁移距离低于10 μg/L IFN-γ处理组，差异具有统计学意义 （P0.05）； 2. Transwell侵袭实验结果显示，IFN-γ处理组的穿膜细胞数均低于对照组，100 μg/L IFN-γ处理组的穿膜细胞数低于10 μg/L IFN-γ处理组，差异具有统计学意 义（P0.05）； 3. 三维培养结果显示，24 h后，对照组细胞可形成平滑、完整的VM管道样结构； 实验组细胞均不能形成VM管道样结构； 4. Western blot结果显示，IFN-γ处理组细胞的p-STAT1表达水平均高于对照组， 100 μg/L IFN-γ处理组细胞的p-STAT1表达水平高于10 μg/L IFN-γ处理组，差 异具有统计学意义（P0.05）； RT-PCR结果显示，IFN-γ处理组细胞的VE-cadherin、Vimentin在mRNA水平 的表达均低于对照组，100 μg/L IFN-γ处理组细胞的VE-cadherin、Vimentin在 mRNA水平的表达低于10 μg/L IFN-γ处理组，差异具有统计学意义（P0.05）； IFN-γ处理组细胞的E-cadherin在水平的mRNA表达均高于对照组，100 μg/L IFN-γ处理组细胞的E-cadherinm在水平的mRNA表达高于10 μg/L IFN-γ处理 组，差异具有统计学意义（P0.05）； Western blot结果显示，IFN-γ处理组细胞的VE-cadherin、Vimentin在蛋白水平 的表达均低于对照组，100 μg/L IFN-γ处理组细胞的VE-cadherin、Vimentin在 蛋白水平的