低氘水对人非小细胞肺癌细胞A549生长抑制作用及其相关机制的初步研究-生物工程专业论文.docx

万方数据 万方数据 上海交通大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文《低氘水对人非小细胞肺癌细 胞 A549 生长抑制作用及其相关机制的初步研究》，是本人在导师的 指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内 容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成 果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方 式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密□，在 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密□。 （请在以上方框内打―√‖） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 上海交通大学硕士学位论文 上海交通大学硕士学位论文 摘 要 目的：研究低氘水对非小细胞肺癌细胞 A549 的生长抑制作用及 其相关机制。方法：体外细胞实验利用 MTT 法检测 50ppm 低氘水对 A549 细胞增殖的抑制作用；体内分别建立裸鼠 A549 皮下移植瘤和原 位移植瘤模型，观察低氘水对裸鼠瘤体的影响。建模结束后，通过实 体瘤观察和 HE 组织染色，比较裸鼠肺组织的变化以及低氘水对皮下 和原位移植瘤瘤体的影响。转录组测序（RNA-seq）技术检测 A549 细 胞内基因表达情况。通过 Gene Ontology 对差异表达基因进行功能聚类 和生物学途径识别。最后利用气质联用的代谢组学研究方法，比较荷 瘤裸鼠血清中代谢物的差异。结果：MTT 实验表明，使用低氘水处理 A549 细胞 5d 和 10d 后均出现显著的细胞生长抑制。裸鼠体内 A549 皮下移植瘤结果显示，低氘水组裸鼠瘤体生长缓慢。裸鼠 A549 原位 移植瘤结果表明，对照组肺组织上产生多个瘤体，分布密集，严重挤 压肺组织，造成肺组织畸形。而低氘水组裸鼠肺组织上仅有少数瘤体， 肺组织形状保持相对正常。肺组织 HE 染色表明，低氘水组肺组织中 的肿瘤病灶明显比对照组小。转录组测序（RNA-seq）分析了对照组、 50ppm-5d 和 50ppm-10d 的 A549 基因表达情况。找到与增殖密切相关 的差异表达基因有 KRT18、ANGPTL、 FTH1、EGFR、GREM1、CAV1 等；与凋亡密切相关的差异表达基因有 BAX、CDKN1A、IER3、PEA15、 DNAJB9、EGFR 等。通过 GO-BP 聚类分析，发现并集差异表达基因 可信度最高的功能聚类为血管生成（p=2.8×10-12），其中包括 ITGAV、 COL4A2、ID1、ANGPTL4、SERPINE、EPHA2 等差异表达基因。基于 气质联用的代谢组学方法研究了裸鼠血清中的差异代谢物。主成分分 析 PCA 得分图结果表明，C 与 D 组血清代谢物无明显差异；C 与 LC 组、D 与 LD 组比较其血清代谢物都有明显差异；而 LC 与 LD 组血清 代谢物的比较，部分样本出现聚集。利用 PLS-DA 使 LC 和 LD 组样本 点出现明显聚类，找到对分组贡献大的 18 种代谢物，多为氨基酸和糖 I 类。结论：低氘水能显著抑制 A549 细胞增殖；低氘水能显著抑制裸 鼠 A549 皮下移植瘤和原位移植瘤的生长。差异表达基因功能聚类提 示低氘水在体内很有可能通过影响移植瘤的血管生成达到抑制细胞增 殖的目的。代谢组学分析表明，低氘水对原位移植瘤裸鼠代谢的影响 主要表现为血清代谢物中糖类物质含量的降低。 关键词：低氘水、非小细胞肺癌细胞 A549，皮下移植瘤，原位移植瘤， 转录组测序 II THE INHIBITION EFFECT OF DEUTERIUM DEPLETED WATER ON NON-SMALL LUNG CANCER A549 AND INITIAL STUDIES OF ITS UNDERLYING MECHANISM ABSTRACT Objective: To study the inhibition effect of deuterium depleted water (DDW) on non-small cell lung cancer A549 and the underlying mechanisms. Methods: In vitro, MTT assay was used to test the growth inhibitio