地榆活性成分抑制肿瘤血管生成作用及机理研究-中药学专业论文.docx

成都中医药大学 成都中医药大学 2015 届硕士学位论文 万方数据 万方数据 【摘要】 目的：筛选地榆抗肿瘤血管生成活性成分，研究地榆活性成分抗肿瘤血管生成作 用，并探讨其作用机制。 方法：① 地榆抗肿瘤血管生成活性部位筛选：采用系统溶剂提取法制备地榆石 油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水共 5 个不同极性部位；以 HUVEC、MCF-7、 Bel-7402 三种细胞增殖模型，采用 SRB 染色法筛选地榆抗肿瘤血管生成的活性 部位；② 活性部位馏分分离、活性馏分筛选与鉴定：采用制备型 HPLC 从地榆 正丁醇活性部位中分离不同馏分；以 HUVEC、MCF-7、Bel-7402 三种细胞增殖 模型，采用 SRB 染色法筛选地榆抗肿瘤血管生成活性馏分；面积归一化法计算 样品的纯度，MS 和 H-NMR 对活性成分进行结构鉴定。③ 活性成分（鞣花酸） 抗肿瘤血管作用研究：以 HUVEC 细胞模型，采用 SRB 法、划痕法及 Matrigel 体外成管实验分别考察鞣花酸对 HUVEC 增殖、迁移及小管形成的影响；体内建 立 S180、H22 皮下荷瘤小鼠模型，随机分为模型组（0.5%CMC 溶液）、环磷酰 胺组（阳性对照，20 mg/kg）、鞣花酸高、中、低（200、100、50 mg/kg）剂量 组，连续给药 10 d，观察鞣花酸对荷瘤小鼠肿瘤生长、体重、胸腺指数及脾脏指 数的影响，免疫组化法检测肿瘤微血管密度。④ 鞣花酸抗肿瘤血管作用机理研 究：采用 RT-PCR 法、ELISA 法、Western blotting 法分别观察鞣花酸对 HUVEC 细胞 PDGFB mRNA 表达、对细胞上清中 PDGFB 分泌及对细胞中 PDGFB、 STAT3、p-STAT3 蛋白表达水平的影响；免疫组化法测定 S180、H22 荷瘤小鼠肿 瘤组织中 PDGFB、p-STAT3 及 STAT3 的表达情况。 结果：① 地榆正丁醇提取部位显著抑制 HUVEC、MCF-7、Bel-7402 三种细胞 增殖（P0.01 或 P0.05）。② 从正丁醇部位中共获得 22 种馏分（1~22#）；5# 馏分（20 μg/mL）对 HUVEC、MCF-7、Bel-7402 三种细胞增殖均有显著抑制作 用（P0.01 或 P0.05）；MS、H-NMR 结果显示，5#馏分为鞣花酸。③ 鞣花酸 （20、10、5μg/mL）显著抑制 HUVEC 增殖、迁移和小管形成（P0.01 或 P0.05）， 其增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性，其迁移和小管形成抑制作用呈剂量依赖 性。④ 鞣花酸（200，100，50 mg/kg）显著抑制 S180、 H22 小鼠肿瘤生长，对 小鼠体重无影响。鞣花酸高剂量组对 S180、H22 小鼠脾脏指数较模型组显著上 I 升（P0.05）。鞣花酸高、中剂量组能显著降低 S180、H22 小鼠肿瘤微血管密度 （P0.05）。⑤ 鞣花酸（20、10、5μg/mL）能显著降低 HUVEC 细胞中 PDGFB 基因和蛋白表达水平（P0.01 或 P0.05），降低 STAT3 蛋白的磷酸化水平（P0.01 或 P0.05），而对 STAT3 蛋白表达总量无变化。与模型组比较，鞣花酸给药组 在 S180、H22 两种瘤体中 PDGFB、p-STAT3 和 STAT3 的表达明显降低。 结论：地榆活性成分鞣花酸具有良好的抗肿瘤及抗肿瘤血管生成作用，其机制可 能与下调 PDGFB 表达并抑制下游 STAT3 的蛋白表达及磷酸化有关。 【关键词】 地榆；鞣花酸；肿瘤血管生成；S180；H22；HUVEC； PDGFB； p-STAT3；STAT3 II 【Abstract】 Objective：To screen the anti-tumor angiogenesis active ingredient from sanguisorba officinalis L, investigate the anti-tumor angiogenesis effect of the active ingredient and the mechanism of Ellagic Acid on anti-tumor angiogenesis. Methods：① The anti-tumor angiogenesis active extract screen from sanguisorba officinalis L. The preparation of five kinds of extracts from sanguisorba officinalis L were investigated using HUVEC, MCF-7, Bel-7402 p