腐植酸生物转化的工艺优化及过程分析-化学工程与技术专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 致谢 本论文是在肖雷老师的悉心指导下完成的。肖老师优秀的做人品格，严谨的治学态度 以及开拓创新的精神和高屋建瓴把控全局的能力，给学生树立了典范作用，对我产生了深 远的影响，这也是导师传授给学生最宝贵的财富。在此，我谨向我的导师致以深深的敬意！ 本文在实验设计及实验分析过程中得到了姚菁华老师的悉心指导，为我的实验提出了 很多宝贵的建议，在此表示 T 衷心的感谢！ 本文的完成还要特别感谢苏显中老师、何环老师在实验方面给予的帮助与指导；感谢 万景旺师兄、潘苹、符雪英、惠鹏岳、王静等同学的关心与帮助；感谢王艳婷、陈炳、周 晓宇等同学在实验过程中给予的各种帮助；感谢冯萍、钟莉平、周敏等舍友在学习和生活 中给予的关怀。 感谢父母的养育之恩，在长达 20 年的求学过程中，他们一直默默支持我，不仅在生 活中给予我关怀，更教会我如何做人。你们营造的温馨和睦的家庭是我努力进步的不竭动 力。 感谢母校中国矿业大学多年的栽培，在母校的七年是我人生中最宝贵的七年。感谢所 有老师，在传授我知识的同时， 他们兢兢业业的敬业精神更将对我今后的人生有深远的 影响。 最后，特别感谢在百忙之中评审论文和参加答辩的专家与评委们，并真诚的期待得到 您进一步的指教与帮助。 万方数据 万方数据 摘 要 腐植酸广泛存在于自然界中，因其结构复杂、分子量大，长期以来未能得到高效利用； 黄腐酸作为腐植质中易溶于水的一类物质，较腐植酸结构简单，含有较多活性基团，具有 更高的生理活性，更容易被利用，因此将腐植酸转化为黄腐酸可以拓宽其应用范围，提高 资源利用率。相比物理、化学方法获取黄腐酸，微生物转化法得到的黄腐酸更加安全可靠， 生产过程更环保。 本文以褐煤基腐植酸为研究对象，利用白腐真菌 AH 对腐植酸进行作用。 首先对白腐真菌 AH 的生长特性和产酶特性展开研究。利用 SMB 液体培养基，考察 了 AH 菌的生长周期，AH 菌接种 3 天进入对数期，第 6 天之后进入稳定期。在鞣酸培养 基、愈创木酚培养基以及苯胺蓝培养基上进行培养，AH 菌能够产生木质素降解酶，其中 降解酶系中的 MnP 的活性最高，LiP 次之，漆酶的活性较小。通过对比试验，表明腐植酸 能够促进过氧化物酶和多酚氧化酶的产生，而不会抑制对腐植酸的降解。 其次利用 PDA、SDA 和 SMA 三种固体培养基对腐植酸进行平板液化，发现腐植酸只 能在 SMA 培养基上被液化。对纯化的腐植酸进行液化，发现其更易于液化。对纯化腐植 酸添加量与添加时间展开研究，结果表明在接种第 3 天、腐植酸添加量为 1g/平板液化效 果最好。对比研究了 AH 菌在 SMB 液体培养基中对处理前后腐植酸的生物转化。纯化后 的腐植酸生物转化黄腐酸的量明显提高，约为处理前试验组的两倍；且随着腐植酸的降解 率提高，黄腐酸产量也相应提高。 对白腐真菌 AH 转化腐植酸的过程进行了初步研究。分别对纯腐植酸、液化产物以及 液化后剩余残渣进行元素分析、红外分析，检测其酸性基团与 E4/E6 值，发现产物中碳元 素含量降低，氧元素含量增加，同时 1HNMR 分析中产物的含氧官能团信号强，表明腐植 酸在微生物作用过程中发生了氧化反应。产物的氢元素含量也增加，表明微生物对腐植酸 作用过程中也发生了加氢反应，从而使产物的不饱和度降低。通过红外分析与酸性基团检 测均发现产物中羧基减少，说明微生物对羧基的作用较大。由红外图谱、1HNMR 谱图及 E4/E6 值可知产物中脂肪链增多，芳环结构较少，表明腐植酸中部分芳环结构被白腐真菌 AH 作用而开环，进一步被转化和利用。残渣的 E4/E6 值较腐植酸小，表明残渣的芳环缩 合程度增大，分子量增加，这说明微生物对腐植酸不仅有解聚作用，也有聚合作用。 最后对白腐真菌 AH 转化腐植酸产生黄腐酸的工艺进行优化。在 SMB 培养基基础上， 通过 PB 试验从氮源添加量、铜离子浓度、锰离子浓度、愈创木酚浓度、培养温度、初始 pH、转速、接种量和 HA 添加量等 9 个因素中筛选出氮源添加量、铜离子浓度和 HA 添加 量三个主要影响因素，采用 Design- Expert 8.0.6 软件设计 Box-Benhnken 试验。通过对二次 回归方程与响应面分析确定最佳转化条件为铜离子浓度 0.29 mmol/L，HA 添加量 0.68 g/80ml，氮源添加量 12.68 g/L，预测黄腐酸含量最大值为 14.16 mg/ml。对优化后的方案进 I 行验证，得到黄腐酸含量为 13.35 mg/ml，与优化值接近。 本文共有图 26 幅，表 18 张，参考文献 101 篇 关键词：腐植酸；黄腐酸；白腐真菌；生物转化 II Abstract Hunic acid(HA) is abundant and ubiq