枸骨根抗大鼠心肌缺血作用及其机制研究-药剂学专业论文.docx

贵阳医学院 贵阳医学院 2012 届硕士研究生学位论文 PAGE PAGE 10 枸骨根抗大鼠心肌缺血作用及其机制研究 专 业：药剂学 导 师：杨世林 教 授 研究生：袁 燕 王永林 教 授 刘艳丽 副教授 摘 要 随着社会人口的老龄化，心血管疾病已成为严重威胁人类健康的主要疾病。 而多种心血管疾病都与心肌缺血有着密切的关系。近年来，中药凭其在治疗心肌 缺血方面疗效好，副作用小的优势受到关注。 枸骨(Ilex cornuta Lindl)为冬青科常绿植物，近年来，对其的药理研究成 果较多，而且不断地深入，主要涉及循环系统的冠心病、高血压、高血脂症以及 内分泌系统的肥胖等[1]。上述研究均为枸骨的叶。枸骨根味苦、性凉。民间用于 肝肾不足、腰膝疾弱、关节疼痛、头风、牙痛[2,3]。我们发现枸骨根含有多种黄 酮和皂苷类化学成分[4,5]，本研究从心肌细胞、动物模型等多方面对枸骨根醇提 物进行抗心肌缺血缺氧的作用及机制研究。 目的：筛选枸骨根活性部位和探讨该活性部位抗心肌缺血作用及机制。方法：采 用2,2-二苯基-1-苦味肼基自由基（DPPH）法、心肌细胞缺氧实验、离体血管平 滑肌实验筛选枸骨根活性部位；采用垂体后叶素和异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺 血损伤实验、冠状动脉结扎实验、心肌细胞缺氧实验、离体血管平滑肌实验来观 察枸骨根活性部位对心肌缺血的影响。结果：枸骨根提取物能显著提高自由基的 清除率，对双氧水（H2O2）和硫代硫酸钠（Na2S3O3·5H2O）诱导的大鼠心肌细胞的 损伤具有显著的保护作用，能抑制由苯肾上腺素（phenylephrine，PE）诱导收 缩的大鼠胸主动脉环，其中30%与60%醇提部分活性较强，因此选定30%+60%醇提 部份为研究对象；枸骨根活性部位（60mg/kg,120mg/kg）能减少由垂体后叶素和 异丙肾上腺素导致的心律失常、T波的改变以及降低异丙肾上腺素所致大鼠血清 中CK、LDH等的活性；能明显降低在体冠脉结扎引起的心肌缺血面积和大鼠血清 中CK、LDH、MDA等的活性，增加SOD的活性。对H2O2诱导的大鼠心肌细胞的凋亡具 有显著的保护作用；枸骨根活性部位(250-10000?g/ml)能明显舒张由PE ( 1 μ M)和 KCL (60 mM)诱导收缩的大鼠胸主动脉环；预先给予枸骨根活性部位(2000 or 8000 ?g/ml)，能抑制由PE和 KCL诱导收缩的大鼠胸主动脉环；在血管条内皮 完整的时候，N′-硝基-L-精氨酸(100 μM)和亚甲基蓝(10 μM) 能明显抑制枸 骨根活性部位对血管条的舒张影响，而吲哚美辛(5 μM)作用不明显；在血管条 内皮去除的时候，格列苯脲(10μM)、四乙铵(5 mM)、氯化钡(10 μM)及4-氨基 吡啶(100 μM) 能抑制枸骨根活性部位对血管条的舒张作用；枸骨根活性部位能 减少PE (1μM)诱导的在无钙液中血管条的短暂收缩幅度及由60 mM KCL诱导的累 加外部Ca2+浓度抑制收缩。结论：枸骨根有对抗大鼠心肌缺血缺氧的作用；枸骨 根活性部位抗心肌缺血的作用机制可能与减轻心肌细胞氧化和缺氧损伤相关；枸 骨根活性部位的血管舒张作用在内皮完整时，其机制可能是通过NO-cGMP途径而 起作用；在内皮去除时，其机制可能是通过开放性K+通道和Ca2+ 通道抑制剂而起 作用。 关键词：枸骨根；血管条；心肌缺血；K+ 通道；Ca2+ 通道 前 言 目前心血管疾病逐渐成为威胁人类生命的头号杀手，调查数据显示，全世界 每年约有一千多万人死于心血管疾病。心肌缺血是由于心脏血和氧的供需失去平 衡所致，是冠心病等缺血性心脏病发生的主要病理生理机制。其是一种发病率高、 治愈率低、死亡率高，并发症多的血管性疾病。冠心病为发达国家人民最主要的 死亡原因，在我国 30 岁以上的人群，发病率占 5%-7%。且呈逐年增加的趋势， 有效地防治冠心病是当前亟待解决的医学难题。近年研究显示，氧自由基，内皮 素和肿瘤坏死因子与冠心病有密切联系[6]。 中医学理论将缺血性心脏病归属于“厥心痛”、“胸痹”、“真心痛”的范畴， 认为：“心主心脉”，心阳不足，可因气滞血瘀阻于经脉，致使心脉不通，不通则 痛，发为“胸痹”。中医认为胸痹的主要病机是气虚血瘀，临床上以宣痹通阳、 活血化瘀、芳香温通及扶正固本等治法治疗收到了非常好的效果。现代医学认为： 当心肌供血受限或心肌对氧的需求异常增加时，都可能造成心肌缺血。临床用于 治疗心肌缺血的药物以西药为主，疗效肯定，但存在不同程度的局限性和副作用。 近年来，中药凭其在治疗心肌缺血方面疗效好，副作用小的优势受到医药界 的关注，在药理研究基础上使中药的临床应用有了更科学的依据，逐渐中药也在 国际上得到不同程度的认同。枸骨(Ilex Cornuta Li