低共熔溶剂双水相体系的构建及其萃取生物分子的研究-有机化学专业论文.docx

The formation of eutectic deep solvents aqueous two-phase system and application in the extraction of biomolecule A Dissertation Submitted for the Degree of Master Candidate：Pang Jingyu Supervisor：Prof. Han Changri Hainan Normal University Haikou, China 独 创 性 声 明 本人声明所提交的学位论文是本人在导师指导下完成的研究工作及取得的研究成果。除 了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含其他人已经发表或着撰写过的研究成果， 也不包含为获得海南师范大学或着其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工 作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 日期： 学位论文著作权声明 本论文作者声明： □ 本论文所有成果均为本人和导师合作研究取得，本人和指导教师都有权使用本成果 学术内容（有第三方约定者除外）。 □ 本论文为导师指导下，本人独自完成。本人独自享有本论文的全部著作权。 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日 期： 日 期： 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者已完全了解海南师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：海南师 范大学有权保留并向国家有关部门或者机构送交学位论文的复印件和电子文本，允许论文被 查阅和借阅。本人授权海南师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入相关数据库进行 检索，可以采用影印、缩印或者其它复制手段保存、汇编学位论文。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日 期： 日 期： I I 摘 要 双水相萃取技术是一种新的分离和提取生物分子的液液萃取技术，其操作程 序时间短，成本低，操作条件温和，并可规模化应用。低共熔溶剂 (DESs) 与盐 形成的双水相是基于高聚物双水相发展而来的一种可设计，更高效的萃取体系。 本文引入离子液体类似物：低共熔溶剂。与离子液体相比，它合成简单，成本低 廉，具有良好的生物相容性，且更绿色环保。 本课题深入研究了低共熔溶剂-盐双水相体系的液液相平衡行为及其分相能 力，为其更进一步的应用提供了充分的理论依据。在此基础上构建了 DESs 双水 相萃取体系，研究了该新型体系对氨基酸和蛋白质的萃取性能。主要研究结果如 下： (1) DES-盐双水相体系的液液平衡性质研究 首先合成了低共熔溶剂 (氯化胆碱和聚乙二醇)-DES，并用熔点测定仪、元 素分析仪、动态热流式差示扫描量热仪、红外光谱和核磁对其对其熔点、元素含 量、热稳定性、红外谱图和核磁氢谱进行了表征。然后构建 DES-盐双水相体系， 研究其相图的性质：双结线和系线。用浊点滴定法测定双结线数据，通过测定上 下相各组分的含量，用物料守恒计算系线相关数据。结果表明，Na3C6H5O7、 K2HPO4、NaH2PO4 和 Na2CO3 均能与 DES 构成双水相，其成相能力依次为： Na2CO3 Na3C6H5O7 K2HPO4 ≈ NaH2PO4。双结线拟合结果表明，该类双水相 体系对经验方程 w1= exp (a-bw20.5-cw2-dw2)拟合的线性相关性最好。同时， DES-K2HPO4 双水相体系的系线长度最长，表明了该体系的两相组分差异最大。 (2) DES-盐双水相体系萃取分离色氨酸的研究 考察了四种不同盐 (Na2CO3、Na3C6H5O7、K2HPO4 和 NaH2PO4) 与 DES 形 成的双水相对色氨酸的萃取效果，采用紫外光谱对色氨酸进行定性及定量分析。 用单因素实验分别对四种双水相萃取体系进行了实验变量的优化，包括氨基酸的 初始浓度、DES 用量、盐的用量和体系的温度。结果表明，在最佳条件下， DES-Na2CO3 双 水 相 、 DES-Na3C6H5O7 双 水 相 、 DES-K2HPO4 双水相和 DES-NaH2PO4 双水相体系对色氨酸的萃取率分别可达到 84.54%、76.14%、91.97% II II 和 87.03%，DES-K2HPO4 双水相体系萃取分离色氨酸的效果最好。通过紫外光 谱及荧光光谱对色氨酸萃取前后的化学结构进行考察，发现色氨酸萃取至富 DES 相后结构没有发生改变。 (3) DES-K2HPO4 双水相萃取分离牛血清蛋白 (BSA) 和木瓜蛋白酶 (PAP) 研究 选取 DES-K2HPO4 体系萃取分离牛血清蛋白 (BSA) 和木瓜蛋白酶 (PAP)， 考察蛋白质浓