富血小板血浆对年轻和年老大鼠脂肪来源干细胞体外成脂分化的影响-外科学(整形外科)专业论文.docx

独创性声明 本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文 中以 明确方 式标明 。本人 完全意 识到 本人将 承担本 声明引 起的一 切法律 后果。 学位论文作者签名： 日期：2015 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本 人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索， 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本论文属于 保密□ ，在 年解密后适用本授权书。 不保密□。 （请在以上方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期：2015 年 月 日 日期：2015 年 月 日 目 录 前 言 1 中文摘要 3 Abstract 5 材料与方法 7 结 果 19 讨 论 26 参考文献 29 综 述 33 参考文献 41 中英文缩略词表 46 致 谢 47 华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE PAGE 1 富血小板血浆对年轻和年老大鼠脂肪来源干细胞 体外成脂分化的影响 硕士研究生：郗 敏 导 师：黄 立 教授 华中科技大学同济医学院附属同济医院整形外科 前 言 干细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞，由于受取材、创伤以及道德伦理等一些方 面的限制，目前成体干细胞在研究与应用方面进行的较多，其中间充质干细胞（MSCs） 是起源于中胚层及外胚层的成体干细胞，属于多能干细胞。成熟的脂肪细胞是一种稳 定细胞，具有有限的增殖和复制能力。为了提高自体脂肪移植存活率，脂肪间充质干 细胞进入了研究者的视野。近些年的研究表明，脂肪组织是成体干细胞的良好来源[1]， Zuk 等学者[2-4]于 2001 年首次分离出脂肪来源干细胞（ADSCs），并发现其生物学特 性和生物功能与骨髓间充质干细胞类似，能够在体外稳定扩增，并具备多向分化的潜 能。相对于其他干细胞，ADSCs 具有以下优点：可从脂肪组织获得，来源丰富，获 取方法简便；脂肪抽吸术对人体损伤小；且其临床效果显著；体外培养方法简单；不 涉及伦理学问题。2003 年开始 Kotaro 等学者[5]利用脂肪干细胞进行细胞辅助脂肪移 植术（Cell-assisted lipotransfer,CAL）临床试验，即用抽吸脂肪组织的一半分离出基质 血管组分（SVF），与另一半混合后注入体内的手术方法，307 例患者术后取得良好 的临床效果，患者对于术后手感、柔软度、外形基本满意，且术后很少出现纤维化、 液化、坏死等并发症[6-8]。Kotaro 认为 ADSCs 在脂肪移植过程发挥重要作用归结于以 下几个原因：一是 ADSCs 可以分化为脂肪细胞，增加脂肪细胞的含量，二是 ADSCs 能分化为血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和周细胞，促进血管新生，三是 ADSCs 通 过旁分泌机制可以影响周围组织[6-8]。 20 世纪 70 年代初，Harke 等在行心脏手术时，尝试分离提取了 PRP[9]。1998 年 Marx 等学者最早提出 PRP 的概念并对其进行研究，指出 PRP 是全血通过离心、分离 得到的血小板浓缩物，其血小板浓度超过了正常全血血小板计数的上线[10、11]。当富血 小板血浆浓度在 100 万/μL 以上或者超过正常全血血小板浓度 4 到 7 倍会产生良好的 临床效果[12]。当 PRP 被凝血酶及钙离子激活后，α颗粒可以释放多种高浓度生长因 子，包括血小板源性生长因子（PDGF-AA、 PDGF-BB、PDGF-AB）、血管内皮生 长因子（VEGF）、转化生长因子-β（TGF-β1、TGF-β2）、表皮生长因子（EGF）、 胰岛素样生长因子（IGF-I、 IGF-II）、白介素-1（IL-1）、骨形态发生蛋白-2,4,6 （BMP-2,4,6）等[10]。此外，PRP 中还包含大量的纤维蛋白、纤连蛋白、玻连蛋白以 及多种高浓度的白细胞[13]。由于 PRP 具有多种生物活性以及广泛的临床应用，目前 成为研究的热点。 对于 PRP 和脂肪来源干细胞，我们的实验团队前期已经做了大量的研究。研究 结果表明，ADSCs 在体外确实能够稳定增殖，且其细胞表面表达特定的分子，具备 多向分化潜能，符合间充质干细胞的特征。激活后的各浓度 PRP 与 ADSCs 的增殖能 力呈正相关，在适宜浓度范围内，PRP 的浓度越高，ADSCs 的增殖能力越强，但剂 量过高则呈现抑制作用。D