富血小板血浆治疗膝关节软骨退行性病变的临床实验研究-外科学(骨科)专业论文.docx

上海交通大学硕士学位论文 上海交通大学硕士学位论文 PAGE PAGE 10 骨缺损处，2 个月后关节 MRI 检查结果显示 PRP-软骨细胞组在原缺损处有明显的软 骨样组织形成，组织学观察也证实这一现象，而单纯 PRP 组却未能有软骨样组织生 成[13]。但有一些研究报道不将 PRP 与软骨细胞复合培养而是将 PRP 与明胶、聚乳酸- 羟基乙酸共聚物(PLGA)、双层胶原基质等载体复合后回植到关节缺损处，也取得了 较好效果。Sun 等[14]取 48 只新西兰大白兔膝关节制作全层关节软骨缺损模型（缺损 直径 5 mm,厚度 4 mm），以 PLGA 为支架材料与自体 PRP 复合后植入关节软骨缺损处， 12 周后组织学和螺旋微 CT 观察发现软骨缺损处已有新的软骨生成；认为 PRP-PLGA 复合物可促进兔关节再生并能重建软骨下骨。Saito 等[15]体内实验证实，含有自体 PRP 和明胶微载体复合物可有效阻止骨关节炎进展；推测可能的机制是 PRP 明胶微载 体复合物可缓慢不断地释放生长因子，促进了软骨基质代谢。还有研究[16]提示，PRP 和双层胶原基质复合物可促进软骨再生，修复较大的软骨缺损。所有的体内和体外 研究表明，PRP 在修复关节软骨的缺损过程中发挥了重要作用。 自上世纪 90 年代 PRP 技术问世以来，学者们对 PRP 的制备技术和设备进行了大 量研究，并取得了显著成果。目前，FDA 认证并商业化生产的 PRP 制备系统有 9 种。 研究表明，部分 PRP 制备系统能快速稳定地获得 PRP，但获得的 PRP 在血小板回收率 及浓度方面存在较大差异。此外，这些 PRP 制备系统价格较昂贵，不利于 PRP 技术 在临床的广泛应用。在国内，虽然 PRP 已应用于骨科、整形外科、口腔外科等多个 领域，但目前尚无专业的 PRP 制备系统，多采用开放式二次离心法制备，具有 PRP 易受外界污染，血小板回收率相对较低，易受操作因素的影响，制备方法不稳定等 缺点。山东威高集团医用高分子制品股份有限公司根据 PRP 在临床应用的特点设计 生产了一套 PRP 制备套装，该套装已通过了国家食品药品监督管理局的认证。临床 上，已有多项成功注射应用 PRP 的研究报道，比如网球肘、难愈性伤口、骨修复、 膝关节置换术、脊柱融合术、跟腱炎和韧带修复等[17, 18]。但是，对关节内注射 PRP 治疗膝关节软骨退行性变的研究鲜有报道。 本实验的第一部分通过分析采用此套装获得的 PRP 中血小板、白细胞和生长因 子的浓度，计算回收率和富集系数，并做相关性分析，以检验此套装的实用性和稳 定性，明确离心力和离心时间，从而为第二部分的临床实验提供依据。 本实验第二部分的目的是与关节内注射施沛特做比较，探索关节内注射 PRP 这 种新方法在治疗关节软骨退行性病变方面的安全性和疗效。首先，通过收集和评估 治疗过程中相关不良事件数量、发生时间、严重程度、持续时间和的处理结果来评 估这种治疗方法的安全性。第二，分析治疗的短期效果，验证此方法可行性和适应 证，为进一步开展更广泛的研究和临床应用提供参考和依据。 第一部分 PRP 制备用套装的评估研究 引 言 目前国际上公认的制备 PRP 的较好方法是二次离心法，但不同的离心力和离心 时间制备的 PRP 中血小板浓度和活性各不相同。我们在前期研究中发现当抽血量低 于 20 mL 时，PRP 制备用套装结合二次离心法（离心力 200g、离心时间 10min）可以 成功制备出含高浓度血小板和生长因子的 PRP。但考虑到临床上对 PRP 量要求较多的 实际情况，我们为了验证此套装的实用性和稳定性，将取血量设定为 40 mL。因此本 部分的实验目的是通过分析用此套装制备的 PRP 中血小板、白细胞和生长因子的浓 度，计算回收率和富集系数，并做相关性分析，以检验此套装的实用性和稳定性， 明确合适的离心力和离心时间，进而为第二部分的临床实验做准备。 材料与方法 1 材料 1.1 仪器及工具 1.1.1 YZB/国 -2005《富血小板血浆（PRP）制备用套装》 生产批号有效期：2 年 （山东威高集团医用高分子制品股份有限公司制造）；（图 1） 套装内有一种用于制作富血小板血浆的离心管，实用新型专利（ ZL 200420081020.8）（图 2） 套装内有采血针、50mL 注射器、离心管、吸管、各种不同刻度注射器、 不同型号的针头、和专用注射 PRP 三通喷枪。(图 3) 1.1.2 PRP 专用试管架（山东威高集团医用高分子制品股份有限公司） 1.1.3 TDL-5 台式多管架悬摆离心机(上海安亭科学仪器厂)（图 4） 1.1.4 KX-21 全自动血液分析仪 (SYSMEX 株式会社，