钙调蛋白等五个基因在人胃癌组织的表达及其启动子区甲基化修饰的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docx

贵阳医学院 贵阳医学院 2011 届硕士研究生论文 钙调蛋 钙调蛋白等五个基因在人胃癌组织的表达及其启动子区甲基化修饰的研究 - PAGE 1 - 钙调蛋白等五个基因在人胃癌组织的表达 及其启动子区甲基化修饰的研究 生 物 化 学 与 分 子 生 物 学 研 究 生 ： 王 妍 导 师 ： 周 建 奖 教授 摘 要 【目的】通过检测胃癌组织中钙调蛋白等五个基因的表达及与临床病理特征的关 系，并分析幽门螺杆菌的感染引起上述基因启动子区甲基化水平的修饰，为幽门 螺杆菌感染促进胃癌发生、发展的机制提供一定的理论和实验依据。 【方法】用实时定量 PCR 的方法检测钙调蛋白、钙网蛋白、氯离子通道、β-肌 动蛋白及周期蛋白依赖性激酶 1 五个基因在临床胃癌组织、淋巴结组织及癌旁组 织中的表达，计算其相对表达水平；分析这些基因的表达与临床病理特征及胃癌 组织中幽门螺杆菌感染状态的相关性；使用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测幽门螺 杆菌感染的胃癌细胞株 SGC-7901 及稳定表达 cagA 基因的胃癌细胞株 SGC-7901 中上述五个基因启动子区甲基化水平。 【 结 果 】钙调蛋白、钙网蛋白、氯离子通道、β-肌动蛋白及周期蛋白依赖性激 酶 1 五个基因在人胃癌组织及淋巴结组织的表达显著高于癌旁组织 (P0. 05)； 与临床病理特征分析结果显示钙调蛋白基因的表达与淋巴结转移及患者生存时 间相关(P0. 05)，钙网蛋白基因的表达与肿瘤大小、pTNM 分期、患者生存时间 及淋巴结转移相关(P 0.05)，氯离子通道基因的表达与 pTNM 分期及患者生存期 相关 (P0.05) ， β - 肌 动 蛋 白 基因 的 表 达 与 pTNM 分 期 及 淋 巴 结 转 移 相 关 (P0. 05)，周期蛋白依赖性激酶 1 基因的表达则与 pTNM 分期、患者生存期及淋 巴结转移相关(P0.05 )；人胃癌组织中幽门螺杆菌的感染与钙调蛋白、氯离子 通道及周期蛋白依赖性激酶 1 基因的表达上调相关（P0. 05）；幽门螺杆菌的 感染可以引起钙调蛋白基因-276 位点发生去甲基化和氯离子通道基因-3474 位点 的发生甲基化修饰。 【结 论】人胃癌组织及淋巴结组织中钙调蛋白、钙网蛋白、氯离子通道、β- 肌动蛋白及细胞周期依赖性激酶 1 基因表达显著升高，其中钙调蛋白、钙网蛋白 及氯离子通道基因的表达与临床病理特征相关，而钙调蛋白、氯离子通道及周期 蛋白依赖性激酶 1 基因的表达与人胃癌组织中幽门螺杆菌感染相关；幽门螺杆菌 的感染可诱导钙调蛋白基因及氯离子通道基因发生甲基化修饰的改变。 【关键词】幽门螺杆菌；DNA 甲基化水平；钙调蛋白；钙网蛋白；氯离子通道 前 言 胃癌流行病学 据 2002 年 WHO 全球常见肿瘤评估报告指出，胃癌是全球第四位常见肿瘤， 每年有 93.4 万新发胃癌病例，约 70 万人死于胃癌。胃癌的死亡率是全球肿瘤死 亡率的第二位，仅在肺癌之后[1]，在亚洲则排名第一位[2]。由于胃癌细胞增殖失 控、分化异常，具有强侵袭转移能力，因此造成胃癌的死亡率居高不下，极大地 威胁着人们的身体健康。 胃癌与幽门螺杆菌 1994 年世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)正式将幽门螺杆菌列为一类 生物致癌因子。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)是一种多鞭毛、末端钝 圆能寄生在胃黏膜上皮细胞的革兰氏阴性微需氧菌，呈典型的螺旋状或弧形，最 先由巴里.马歇尔和罗宾.沃伦两位科学家发现，并获得了 2005 年的诺贝尔生理 学与医学奖。据流行病学资料显示世界近一半的人口被 Hp 感染[3]。 研究证实 Hp 的感染会增加胃黏膜细胞的遗传不稳定性，如增加细胞 DNA 损 伤并降低其修复活性、引起线粒体 DNA 和细胞核 DNA 突变等[4]，这些因素能引起 基因发生突变，从而诱导胃癌发生。Hp 在胃黏膜定植、感染后，能分泌多种毒力 因子如空泡毒素蛋白(Vacuolating cytotoxin A,VacA)、毒素相关基因 A(cagA) 编码的毒素相关蛋白 A(Cytotoxin associated protein A,CagA)、表面脂多糖等， 这些因子加重胃黏膜损伤，促进慢性炎症向肿瘤发展。其中，毒素相关蛋白 CagA 作为 Hp 重要的致病因子之一而被广泛关注。经证实近 60%的 Hp 能表达 CagA 蛋白， 游离的 CagA 通过 cag 致病岛(cag pathogenicity island,cagPAI)编码的Ⅳ型分 泌系统运输到胃上皮细胞内。进入胃上皮细胞后，CagA 通过依赖或不依赖酪氨酸 磷酸化途径与多种细胞蛋白作用，调控细胞生长和运动相关的信号通路，使胃上 皮细胞发生转化而致癌变[5]。Mimuro 等