睾丸注射干扰Zfy基因对绵羊后代性别影响的研究-兽医学专业论文.docx

本研究由以下项目资助： “兵团博士资金专项” （项目编号：2012BB016) Doctor’s Special Fund of Xinjiang Production and Construction Corps(project number: 2012BB016) “石河子大学研究生创新基金”（项目编号：YJCX2010-Y02) Creative Foundation of ShiHeZi University (project number: YJCX2010-Y02) 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果.据我所 知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。 研但名:亏陆明 时间 : 1年 {月 3 日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向 国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并 允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论 文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 时间: )T1?1f b 月七 时间: 2P1 年们 8 日 I I 摘 要 控制家畜的性别，生产出符合畜牧业生产需要性别的家畜，一直是畜牧业工 作者研究的课题。绵羊性别控制对扩大群体、快繁有着非常重要的作用。精子的 发生过程受多方面体内环境的控制和调节。经研究发现 Zfy 基因是 Y 精子发生过 程中的重要基因，利用 RNAi 技术干扰 Zfy 基因的表达，限制甚至损害 Y 精子的 结构或功能发育，从而达到性别控制的目的。 目的：本研究采用质粒载体介导的 RNAi 技术靶向抑制性别决定相关基因 Zfy 的表达，研究绵羊后代性别比例的变化。 方法：构建质粒载体 pSilencer /Zfy-shRNA，大量制备重组质粒并对公羊 进行睾丸打点注射，每隔 7 天注射 1 次，连续注射 3 次，最后一次注射后第 5 天，即注射载体第 26 天，每天采集公羊精液，连续 17 天，同时对超排母羊进行 人工授精，观察后代的性别比例。 结果：对出生的 216 只羔羊的性别统计发现，睾丸注射载体第 34 天进行配 种所产羔羊母羔率达 81.8%，显著高于正常性别比例(P0.05)。 结论：成功构建了抑制绵羊 Zfy基因表达的 RNA 干扰载体，在睾丸注射载体 后 34 天配种可提高绵羊母羔率(P0.05)，通过干扰 Zfy基因的表达实现了对绵 羊受精前的性别控制，同时也为研究其它动物受精前的性别控制奠定了基础。 关键词：Zfy基因；RNAi；绵羊；性别控制 I I II II III III Abstract Controling sex of livestock and producing livestock to meet the needs of graziery are always studied by animal husbandry researchers.Sex control of sheep is responsible for expanding the population and rapid propagation.The progress of spermatogenesis is controled and regulated by multifaceted environment factors in vivo.The study found that Zfy gene is required for Y spermatogenesis.RNAi is used for interferencing the expression of Zfy gene,and restricts or even damages the structure or function of Y sperm development,so as to achieve the purpose of sex control. Objective: In pape, in order to study the change of Ovis aries offspring gender ratio, the plasmid-mediated RNAi inhibits the expression of gender determination gene Zfy. Method: Const