副猪嗜血杆菌基因组表达文库的构建与其荚膜多糖输出蛋白基因的筛选和免疫原性研究-预防兽医学专业论文.docx

Y1801516论文独创性声明 Y1801516 : 11111111111111111111111111111111 本人郑重声明:所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的 成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个 人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机 构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 阳生签名: 如品 rY.olo 年 6 月Jo日 关于论文使用授权的声明 本人完全了解四川农业大学有关保朗、使用学位论文的规定，即:学校有权保留并向国家带 关部门或机构法交论文的复印件和电子版，允许论文被蛮阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描 等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不问方式在不肉媒体上发表、传播学 位论文的全部成部分内容。 叫 名ι: 已公刀飞坷巧(叼 )，/0 年 6月 ω 日 JfJ(o 年 6月却日 咽-?..?句 咽- ?..? 句品 句，h … 备 设 器 仪 要 吏 a L 工们 Jμ 方 3 摘要………………………………… 1 ABSTRACT ……………...………… ……………w 缩略词表川…….，..….……川 VII 第一章文献综述..……… 1 1 副猪嗜血杆商研究进展………………… 1 1.1 副猪嗜血杆菌生物学特性……………………………………… 1 1.2 副猪嗜血杆菌致病因子………………………………………………… 3 1.3 副猪嗜血杆菌基因研究现状……………………………………… 5 2 基因组文库构建技术及其筛选策略……………………………… 6 2.1基因组文库构建的基本原理及主要步骤………川……… 6 2.2 基因组文库的主要筛选策略……………………川…… 8 3 细菌毒力基因体内表达检测系统研究进展……………… 10 3.1细菌毒力基因体内表达检测方法研究进展……………………… 10 3.2 体内诱导抗原鉴定技术基本原理及步骤………… 12 3.3体内诱导抗原鉴定技术的优点与缺点……………… 14 3.4体内诱导抗原鉴定技术的应用与展望……………..…… 15 第二章副猪嗜血杆菌 sc斗株基因组表达文库的构建及鉴定研究……………… 18 ohvtlohv1AKV1A ohv tl ohv 1A KV 1A AW， tA 阵币 配 剂 试 及 基 养 墙 d L 粒 质 及 株 菌 Z … 剂 试 要 主 L tu 材 IJ IJ 3.1 副猪嗜血杆菌 SC斗株的活化……·……·………………………… 21 3.2 副猪嗜血杆菌 SC-l 株基因组 DNA 提取…… 21 3.3副猪嗜血杆菌 SC-l 株基因组酶切……………… .22 3.4副猪嗜血杆菌 SC-l 株基因组 DNA 片段的凹收………………… 24 3.5 构建文库使用载体的制备川……………川 24 3.6 副猪嗜血杆菌 SC-l 株基因组文库构建…………川……… ..26 3.7 副猪嗜血杆菌 SC斗株基因组文库的 PCR 鉴定…………………………… 29 3.8 重组质粒测序及序列分析………… 30 4 结果与分析………………………………川 30 4.1副猪嗜血杆菌 SC斗株的活化……………川……·…… 30 4.2 副猪嗜血杆菌 SC-l 株基因组 DNA 提取…… 31 4.3副猪嗜血杆菌 SC-l 株基因组酶切……..…………………………… 31 4.4副猪嗜血杆菌 SC-l 株基因组 DNA 片段的回收……………… 32 4.5 构建文库使用载体的制备…………… 33 4.6 副猪嗜血杆菌 SC-l 株基因组文库构建………………………… 33 4.7 副猪嗜血杆菌 SC-l 株基因组文廊的 PCR 鉴定及插入率估算………… 33 4.8 意组质粒测序及序列分析………………… 34 5 讨论……… 34 5.1基因组 DNA 的质量，……·…………………… 34 5.2 限制性内切酶的选择………………………，………… 35 5.3表达载体的选择………………………… 36 5.4基因组文库的质量.，………….，.，.，…………·… 36 6小结……………·………………………… 37 第二章副猪嗜血杆菌 SC-l 株体内诱导抗原基因的初步筛选及鉴定研究……… 38 1 号|宫…………...川…………… 38 2 材料…………