供者来源脾脏基质细胞输注延长皮肤移植物存活及其机制-免疫学专业论文.docx

华中科技 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 -I - I 主要缩略词表 APC Antigen presenting cell 抗原提呈细胞 CD Cluster of differentiation 分化群 cDNA Complementary deoxyribonucleic acid 互补脱氧核糖核酸 CFSE Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester 羧基荧光素二醋酸盐 琥珀 酰亚胺酯 DC Dendritic cell 树突状细胞 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 dNTP Deoxynucleoside triphosphate 脱氧核糖核苷酸 FCM flow cytometry 流式细胞术 FITC Fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 HE Hematoxylin-eosin 苏木素-伊红 IDO indolamine 2,3-dioxygenase 吲哚胺 2，3－二氧化酶 IL Interleukin 白细胞介素 MHC Major histocompatibility complex 主要组织相容性复合体 MLR Mixed lymphocyte reaction 混合淋巴细胞反应 mRNA messenger RNA 信使 RNA MST Mean survival times 平均存活时间 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 PE Phycoerythrin 藻红蛋白 RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction 逆转录聚合酶链反应 TGF-β Transforming growth factor-β 转化生长因子 β Treg Regulatory T cell 调节性 T 细胞 Tris Tris(hydroxymethyl) aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 -II - II 供者来源脾脏基质细胞输注 延长皮肤移植物存活及其机制 中文摘要 硕士研究生：刘莉 导师：方敏 副教授 龚非力 教授 华中科技大学同济医学院免疫学系 目的：以异基因小鼠皮肤移植为模型，探讨供者来源脾脏基质细胞输注延长同种 异体皮肤移植物存活的效应、细胞学基础与分子机制，为设计防治移植排斥反应 的新策略提供线索。 方法：用胶原酶 D 消化法分离供者 Balb/c 小鼠（H-2 d）脾脏基质细胞，体外培 养脾脏基质细胞(SSC)，RT-PCR 分别检测 SSC 与基质细胞来源 DC (Stromal DC) IL-10 的 mRNA 表达水平及 SSC 在 IFN-γ 刺激下 IDO 的 mRNA 表达水平；MLR 检测脾脏基质微环境对混合淋巴细胞培养体系中 T 淋巴细胞增殖的影响；细胞过 继给 C57BL/6 小鼠 7 天后，将 BALB/c 小鼠皮肤移植给 C57BL/6 小鼠，观察移 植物存活时间；皮肤移植后 7 天，取移植皮片，组织学检测移植物组织中炎性细 胞浸润； RT-PCR 检测受者小鼠脾脏细胞 TGF-β、IL-10、IL-2 的 mRNA 表达水 平；流式细胞术检测受者小鼠脾脏树突状细胞亚类及 T 细胞亚类。 结果：一、体外分离培养脾脏基质细胞，并检测其抑制功能。 1．脾脏基质细胞微环境中有 CD11c+CD45RB+DC 产生，即 Stromal DC; Stromal DC 分泌 IL-10, LPS 刺激 24 小时后 IL-10 表达明显增加。 2. IFN-γ 诱导 SSC 产生 IDO 活性。 3．脾脏基质细胞微环境能显著抑制同种反应性 T 细胞增殖。 二、供者脾脏基质细胞过继输注延长异基因小鼠皮肤移植物存活时间及其机制 以 BALB/c 小鼠为供者，C57BL/6 小鼠为受者，进行背部皮肤移植。移植术 - PAGE - PAGE VI 前实验组通过尾静脉输注 5×106 供者脾脏基质细胞，并以 PBS 和第三方小鼠（C3H 小鼠）作为对照。 1．移植物存活时间（mean survival time, MST） 与 PBS 对照组（MST: 8.50±1.049 天）和第三方 C3H 组（MST: 8.67±0.58 天） 相比较，供者脾脏基质细胞过继输注，能显著延长皮肤移植物存活时间（MST: 11.25±2.12 天）（n=8，p﹤0.05）。 2．移植皮片组织学检查 移植术后 7 天，取移植皮片制石蜡切片，常规 HE 染色，观察移植物组织中 炎性细胞浸润。与 PBS 对照组和