根癌农杆菌介导FPF1基因转化菊花的研究-园林植物与观赏园艺专业论文.docx

内部农业大学硕.L学位论文 j商紫阳 根癌农杆菌介导 FPFl 基因转化菊花的研究 研究生:皮伟 指?教师:李名扬教授 〈商商农业大严园艺园林学院，重庆 400716) 摘要 据史料记载，早在三千年前，古埃 22积叙利亚就已开始裁络蔷薇和铃兰，我国关于花卉栽培的 文献记载绩单的是吴王夫差曾在会稽营 1!据桐园? r-植花木。现在，花卉产业已成为世界上最具活 力的产业之一。囱于经济的发展和市场们剌激，花卉育种越来越受到植物育种工作者的重视，对新 ..[品种、高品质花卉的要求促进了花卉育手 i1 ..[ 作的不断发展。人们通过常规杂交育种、辐射育种、组 织培养育种、多倍体育种、航天育种等手受培育了大量的花卉新品种。尤其是上个世纪 90年代以来， 随着分子生物学和基因工程技术的发展，利用转基因技术培育新品种成为育种工作者研究的热点。 将目的基因定向导入植物细胞或组织中，培育成植株，则可获得人们预期的新材料〈新品种) ，从 而为花卉的定向育种提供了一条更有效们新途径。目前已有数十种花卉植物获得了转基因撞株。 菊花是我国原产的十大名花之一。主;了菊花的文字记载最早见子。 L记》中，距今已有两千余 年的历史。菊花不仅为我国人民所喜爱，而且早已传至国外，混为世界各国广泛载培。虽然全常界 菊花品种已有 7000 多个，我国也多达到 )0 多个，但绝大多数品种自然花期集中在 1 1 月前后，仅少 数花型较小、花色单调的品种能在夏季里二字秋开花。因此，丰富的菊花品种资源并未得到充分的利 用。菊花的花期问题在一定程度上制约 1菊花生产的发展。在菊花的育种工作中，国内外育种者多 集中在花色、花形及抗逆性等方面的研 7;，而改变花期则主要通过人为光照处理的方式来解决。人 为光照处理不仅成本高，技术上要求严札，而且并不是所有品种都适合这种处理。这也是至今切花 市场上菊花品种单一的原因之一。我因每京农业大学的李鸿渐为了攻克菊花花期局限的难题，在 1986 年开始利用常规杂交育种法迹行切有菊新品种的选育工作，培育了上百个新品种。虽然花形、 花色各异，但并为从根本上解决花期的。|题。传统的杂交育种方法存在随意性大、杂交难度大、周 期太长、难以打破基因连锁等不足。 据研究，植物的开花期是由基因控和的，环境因予以及细胞自身的生氏状况对这些基囚的表达 起着调控作剧。环境因子对植物开花时|毛|决定基肉的满授是通过光周期和春化作用米实现的。有的 植物对日熙、长度非常敏感，必须经历一瓦时间的氏曰熙、或短日照才能开花，因而相应地分为氏臼 jff、 植物和短日照植物:有的植物必须经过一定时间的低掘诱导才能开花， f民混对开花的促边作用被称 为春化作则:还有的植物营养生民;到 -11 阶段后，即使没有远在的环境冈子的诱导也会开花。菊花 是典烈的短日照植物，植株在营养生 i乏主 i 一定阶段后，必需经历一段时闵的短日照诱导，才能进行 阴雨农业大学硕士学位论文 摘赘 花芽分化和I开花。 从拟南芥和l金鱼草中，人们利用突 体已经克隆到了一系列.L j 开花时间有关的基因，如 :FPFI 、 co、FCA 、LD 、API 、LFY 等开花促进 J ，;冈不11 EM 川、 LHY 、TFLI 得开花拇制基肉，并对这些基囚 的结构、功能以及表达调控进行了深入 II f 究，有的已经进入了两用研究阶段.如:华志明通过控制 APl 基因的超表达导致转基因烟草的花 J!J 明显提前;杨树i丘常开花需要 8- 10 年t Coupland 将拟南 芥 LFY 基因转入杨树中， 67 个月就刃花;安利忻将 APl 基因转入矮牵牛，转基因植株表现出持 续不断开花的特性固 FPFl 基因是 1990 年 Melzer 等人}}拟商芥 cONA 文库中分离得到的序列长约 330bp 的促进开 花基因，他们检测到该基因在光周期诱?后很快在拟南芥顶端分生组织中表达。后来， Kanial931等 将 FPFl 基因连上 CaMV35S 启动子再导入拟南芥中，使转基肉植株的花期明显提前。黄琼华 (2002) 将该基冈转入油菜中，也获得了具有明 早 花、早熟性状的转化植株。 本研究旨在通过对菊花再生体系及汇杆菌介导的遗传转化体系的研究，将 FPFl :基因导入到菊 花中，以期获得花期提前的菊花新材料，并为利用转基因技术改良菊花品种的广泛运用打个.基础。 主要工作和结果如下: 1.商频再生体系的研究 通过对 5 个菊花品种幼叫-再生的研 红 ，获得了黄秀芳以幼叶为外植体的高频再生体系，在 以 MS+ 1.0mgIL BA+O.lm g/L NAA 的，.化培养基中再生率可高达 94%a ;在 112MS 培养基中添加